Test biosensora bakteryjnego do wykrywania biodostępnej rtęci w warunkach beztlenowych

Rozpocząć od zestawu testowego zawierającego fiolki umieszczone w komorze beztlenowej.

Każda fiolka zawiera pożywkę uzupełnioną azotanem sodu, jonami rtęci i różnymi stężeniami siarczanu magnezu.

Obróć zestaw, aby wymieszać składniki, a następnie inkubuj.

Podczas inkubacji siarczan magnezu sprzyja tworzeniu niebiodostępnych kompleksów rtęci, redukując wolne, biodostępne jony rtęci w sposób zależny od stężenia.

Następnie dodaj indukowane biosensory, genetycznie zmodyfikowane bakterie przenoszące plazmid i wymieszaj.

Plazmid zawiera regulator transkrypcji reagujący na rtęć i promotor połączony z fluorescencyjnym genem reporterowym.

W warunkach beztlenowych bakterie wykorzystują azotany do oddychania.

Wolne jony rtęci dostają się do komórek, wiążą regulator transkrypcji i aktywują gen fluorescencyjny, wytwarzając białka fluorescencyjne.

Przenieść podwielokrotności z każdej fiolki na płytkę wielodołkową.

Za pomocą czytnika płytek zmierz intensywność fluorescencji.

Spadek fluorescencji wraz ze wzrostem stężenia siarczanu magnezu potwierdza zdolność biosensora do wykrywania zmian w biodostępnej rtęci.

Przed rozpoczęciem eksperymentu sprawdź monitor anaerobowy, aby upewnić się, że w komorze beztleno