JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:04 min. • October 30th, 2025
Zacznij od komórek ameba Dictyostelium discoideum typu dzikiego zawieszonych w zimnym buforze.
Bufor zapewnia środowisko jonowe, które utrzymuje stabilność membrany.
Następnie dodaj komórki ameby do probówki zawierającej plazmid z docelowym genem.
Delikatnie wymieszaj roztwór, aby plazmidy znalazły się w bliskim kontakcie z powierzchnią ameby.
Przenieś tę mieszaninę do wstępnie schłodzonej kuwety do elektroporacji i wykonaj elektroporację.
Podczas elektroporacji impulsy elektryczne tworzą przejściowe pory w błonie komórkowej.
Plazmid dostaje się przez te pory do cytoplazmy, a następnie przemieszcza się do jądra.
Następnie przenieś komórki ameby na szalkę Petriego zawierającą płynne podłoże uzupełnione bakteriami żywicielskimi.
Ameba zjada bakterie poprzez fagocytozę, dostarczając niezbędnych składników odżywczych do regeneracji komórek i umożliwiając ekspresję plazmidu.
Bakterie żywicielskie wspomagają transfekcję w komórkach ameby typu dzikiego, bez potrzeby stosowania specjalnych szczepów, które rosną bez bakterii.
Ponownie zawieś komórki w buforze H40.
Następnie dodaj 100 mikrolitrów komórek do probówki zawierającej od jednego do dwóch mikrogramów DNA. Pipetować w górę i w dół, aby wymiesz
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych