Wzbogacanie lipoprotein bakteryjnych za pomocą niejonowej separacji faz detergentowych

Weź lizat bakteryjny zawierający hydrofilowe białka, lipoproteiny i agregaty białkowe.

Dodaj zimny, niejonowy detergent zdolny do separacji faz w wyższych temperaturach.

Inkubować na lodzie i okresowo mieszać. Detergent wiąże się z ugrupowaniem lipidowym lipoproteiny, tworząc kompleksy białkowo-detergentowe.

Podgrzej mieszaninę, aby wywołać separację faz. Lipoproteiny koncentrują się w fazie detergentu, podczas gdy białka hydrofilowe pozostają w fazie wodnej.

Odwirować w temperaturze pokojowej, aby utrzymać dwufazową separację.

Odrzuć fazę wodną, dodaj zimny bufor do fazy detergentu i wymieszaj.

Powtórz cykl chłodzenia, ogrzewania i wirowania, aby wzbogacić lipoproteiny.

Następnie dodaj zimny bufor i odwiruj w niskiej temperaturze, aby zagnieździć agregaty nielipoproteinowe.

Przenieść supernatant do probówki zawierającej rozpuszczalnik wytrącający białka i inkubować w temperaturze poniżej zera w celu wytrącenia lipoprotein.

Odwirować w temperaturze pokojowej i odrzucić supernatant.

Wytrącone lipoproteiny są gotowe do dalszych badań.

Uzupełnij supernatant środkiem powierzchniowo czynnym TX-114 do końcowego stężenia 2%, dodając równą objętość 4% środka powierzchniowo czynnego w lodowatym TBSE.