Selektywne oczyszczanie białka bakteryjnego metodą chromatografii jonowymiennej
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:28 min. • October 30th, 2025
Rozpocznij od roztworu żywicy jonowymiennej zawierającego dodatnio naładowane grupy funkcyjne do selektywnego wiązania białek.
Następnie weź ekstrakt białkowy uzyskany z komórek bakteryjnych gospodarza zmodyfikowanych w celu nadekspresji czynnika wirulencji z patogennej bakterii Helicobacter pylori.
Ekstrakt zawiera docelowy czynnik wirulencji wraz z białkami komórek gospodarza w buforze o pH 8.
Wymieszaj ekstrakt białkowy z żywicą i inkubuj z mieszaniem, aby zapewnić równomierną interakcję białko-żywica.
Białka gospodarza, mające punkty izoelektryczne niższe niż pH buforu, stają się naładowane ujemnie i wiążą się z dodatnio naładowaną żywicą.
Białko docelowe, z punktem izoelektrycznym zbliżonym do pH buforu, pozostaje w dużej mierze nienaładowane i nie jest związane.
Przenieść zawiesinę białkowo-żywiczną do kolumny chromatograficznej i pozwolić żywicy osiąść.
Zebrać fazę ciekłą zawierającą niezwiązane białko docelowe.
Przepłucz żywicę buforem, aby zapewnić maksymalny odzysk docelowego białka.
Aby przygotować 15 mililitrów żywicy DEAE, zawiesić 0,6 grama suchego proszku żywicy DEAE w 30 mililitrach buforu Tris-HCl w temperaturze pokojowej przez co najmniej jeden dzień.
Odwirować żywicę w tem
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych