Pomiar wiązania leku z kazeum ze zmian gruźliczych za pomocą metody szybkiej dializy równowagowej

Weźmy jednorodną zawiesinę kazeum - nekrotycznego, bogatego w lipidy materiału ze zmian gruźliczych, który zawiera w sobie tolerancyjne na leki prątki.

Dodać badany lek do homogenatu i wiru, aby ułatwić jego interakcję z matrycą kazeum.

Umieścić w płycie podstawy wkładkę do dializy szybkiej równowagi zawierającą komorę dawczą i biorczą oddzieloną półprzepuszczalną membraną.

Załaduj homogenat z dodatkiem leku do komory dawczej i dodaj bufor do komory odbiorczej.

Uszczelnić płytkę i inkubować z rotacją.

Podczas inkubacji wolny lek dyfunduje przez błonę, osiągając równowagę między obiema komorami.

Po osiągnięciu równowagi należy rozcieńczyć próbkę dawcy buforem, a próbkę biorczą homogenatem bezlekowym, aby znormalizować warunki matrycy do oznaczania ilościowego leku.

Na koniec określ ilościowo stężenie leku i oblicz niezwiązaną frakcję leku lub fu.

Fu odzwierciedla wolny lek dostępny do dyfuzji do kazeum i docierania do prątków tolerujących leki.

Dodać 6,5 mikrolitra przygotowanego związku do 643,5 mikrolitra homogenatu. Aby osiągnąć końcowe stężenie pięciu mikromolów i wiru.

Następnie umieść czerwone wkładki w płycie podstawy. Przygotować wkładki do każdego testu, każdy związek w trzech egzemp