Mikroprzepływowa mikroskopia poklatkowa do badania trwałości antybiotyków w bakteriach
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 5:02 min. • October 30th, 2025
Zacznij od wykładniczo rosnących komórek bakteryjnych eksprymujących fluorescencyjnie znakowane białko fuzyjne wiążące DNA, aby uwidocznić nukleoid.
Dodaj komórki do wlotów komórek wstępnie przygotowanej płytki mikroprzepływowej.
Następnie wprowadzić pożywki zawierające antybiotyki i pożywki wolne od antybiotyków do oddzielnych wlotów roztworu.
Uszczelnij płytkę, zamontuj ją na stoliku mikroskopu i rozpocznij obrazowanie poklatkowe.
Najpierw załaduj komórki do komory hodowlanej.
Następnie perfunduj pożywkę wolną od antybiotyków do komory, aby wspomóc wykładniczy wzrost komórek.
Na koniec wprowadź pożywkę zawierającą antybiotyki.
Antybiotyk indukuje pęknięcia dwuniciowego DNA, zabijając wrażliwe komórki. Komórki te wykazują zagęszczone, niereplikujące się nukleoidy o stabilnej fluorescencji.
Przełącz się z powrotem na pożywki wolne od antybiotyków, aby przyspieszyć powrót do zdrowia.
Stałe komórki - mała subpopulacja, która przeżywa leczenie antybiotykami - wznawiają replikację DNA, wydłużają się i dzielą.
To odzyskiwanie prowadzi do zwiększonej fluorescencji w komórkach trwałych, co pozwala na wizualne odróżnienie ich od komórek podatnych.
Usuń roztwór konserwujący z każdej studzienki płytki
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych