JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:09 min • October 30th, 2025
Zacznij od hodowli bakteryjnej i wykonuj seryjne rozcieńczanie, aby zmniejszyć gęstość komórek.
Wziąć małą porcję końcowego rozcieńczenia i umieścić ją na płytce agarowej.
Dodaj sterylne szklane kulki i delikatnie potrząśnij płytką, aby zapewnić przestrzenne oddzielenie komórek, co jest niezbędne do uzyskania dobrze wyizolowanych kolonii.
Usuń szklane koraliki, a następnie odwróć płytkę i inkubuj.
Poszczególne komórki namnażają się i tworzą oddzielne kolonie, tworząc kulturę monoklonalną, w której każda kolonia składa się z genetycznie jednolitej populacji bakterii.
Wybierz poszczególne kolonie i przenieś je do oddzielnych probówek zawierających płynne podłoże.
Inkubować probówki z mieszaniem. Po inkubacji oceń zmętnienie każdej kultury.
Komórki bakteryjne zawieszone w pożywce rozpraszają światło, sprawiając, że kultury wydają się bardziej mętne wraz ze wzrostem gęstości komórek.
Wybierz probówkę o najwyższym zmętnieniu, która wskazuje na najgęstszą populację bakterii monoklonalnych, do dalszych zastosowań.
Oznacz trzy butelki przygotowane ze 100 mililitrami bulionu LB Lennox numerem jeden, numer dwa i numer trzy.
Odpipetować 0,1 mililitra powstałej kultury bakteryjnej do pierwszej butelki. Zakręć butelkę i obracaj nią ręcznie przez minutę, aby uzyskać jednorodny roztwór. Następnie odpipetuj 0,1 mililitra z butelki numer jeden do butelki numer dwa. Ponownie zakręć butelkę i kołysz nią ręcznie przez minutę. Ostatnie rozcieńczenie wykonać pipetując 0,1 mililitra z butelki numer dwa do butelki numer trzy. Zakręć butelkę i potrząsaj nią ręcznie przez minutę.
A następnie odpipetować 20 mikrolitrów roztworu na każdą z czterech szalek Petriego. Następnie umieść cztery autoklawowane szklane koraliki o średnicy trzech milimetrów w każdej z szalek Petriego. Zamknij pokrywki szalek Petriego i potrząsaj nimi ręcznie przez minutę.
Po zakończeniu odwróć szalki Petriego do góry nogami i inkubuj płytki w inkubatorze o temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 24 godziny.
Za pomocą szpatułki ze stali nierdzewnej wybierz powstałe bakterie monoklonalne z czterech szalek Petriego i umieść je w pozostałych siedmiu probówkach zawierających 12,5 mililitra bulionu LB Lennox. Pozostaw probówki w inkubatorze o temperaturze 37 stopni Celsjusza na 24 godziny, a następnie wybierz tę, która ma największe rozproszenie światła, stosując wizualną metodę kolorymetryczną.