JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:37 min. • October 30th, 2025
Weźmy posiew Lactococcus lactis wykazujący ekspresję peptydazy NisP związanej z błoną.
Wymieszaj kulturę z podłożem bogatym w składniki odżywcze.
Dodaj stopiony agar, wymieszaj i wlej do talerza, aby równomiernie rozprowadzić L. lactis w agarze .
Po zestaleniu wbij dołki w agar.
Następnie weźmy rekombinowaną E. coli wytwarzającą warianty prekursorowe peptydu przeciwdrobnoustrojowego nizyny.
Odwirować w celu osadzenia bakterii, odrzucić supernatanty i ponownie zawiesić granulki w buforze.
Sonikacja w celu lizy bakterii, odwirowanie i przeniesienie supernatantów do świeżych probówek.
Normalizuj lizaty do równej gęstości optycznej za pomocą buforu, aby zapewnić stałe poziomy peptydów.
Każdą próbkę należy pipetować do indywidualnych studzienek agarowych i inkubować próbki.
Podczas inkubacji peptydy prekursorowe nizyny dyfundują do agaru i są rozszczepiane przez NisP, tworząc dojrzałą nizynę.
Dojrzała nizyna hamuje wzrost L. lactis , tworząc wyraźne aureole wokół studni.
Porównaj rozmiary halo, aby ocenić aktywność przeciwdrobnoustrojową wariantów nizyny.
Dodaj jeden mililitr prekultury Lactococcus lactis do 25 mililitrów bulionu 2X M17 zawierającego 10 mikrogramów na mililitr chloramfenikolu i dwa
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych