JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:49 min. • October 30th, 2025
Weź podstawową kulturę Bacillus mycoides, rhizobacterium wspomagającego wzrost roślin, i rozprowadź inokulum na płytce hodowlanej.
Inkubuj płytkę, aby promować namnażanie się bakterii w koloniach.
Zaszczepić pojedynczą kolonię w płynnym podłożu i inkubować z potrząsaniem, aby pobudzić wzrost bakterii.
Rozcieńczyć kulturę za pomocą płynnej pożywki, aby uzyskać optymalną gęstość dla testu.
Dodaj wysięki z korzenia ziemniaka do kultury, aby naśladować interakcje roślina-mikroorganizm.
Inkubuj kulturę z mieszaniem, ułatwiając interakcję cząsteczek sygnałowych z receptorami bakteryjnymi.
Ta interakcja indukuje szlaki sygnałowe, które aktywują białka regulatorowe, które wiążą się z DNA i zmieniają ekspresję genów.
Przenieś kulturę do probówki i odwiruj komórki bakteryjne w osad.
Wyrzuć supernatant i zanurz probówkę w ciekłym azocie w celu błyskawicznego zamrożenia komórek.
Przechowuj komórki, aby przeanalizować wywołane wysiękiem z korzeni roślin zmiany w ekspresji genów bakteryjnych.
Aby wyhodować bakterie, należy przerzucić szczep B. mycoides z bulionu glicerolu o temperaturze minus 80 stopni Celsjusza na płytkę agarową LB i inkubować płytkę w temperaturze 30 stopni Celsjusza przez noc. Następnie zaszczepij płynną pożywkę LB pojedynczą kolonią z płytki i hoduj kulturę w inkubatorze z wytrząsaniem z prędkością 200 obr./min przez noc w temperaturze 30 stopni Celsjusza.
Aby poddać je działaniu i pobrać próbki, należy rozcieńczyć przez noc kulturę B. mycoides 90 mililitrami wstępnie podgrzanej pożywki LB do początkowego OD600 punktu zerowego zero pięć w kolbie o pojemności 300 mililitrów. Następnie dodaj 10 mililitrów wysięku korzeniowego do kultury i użyj 10 mililitrów sterylnej, dejonizowanej wody jako kontroli. Następnie inkubuj je w temperaturze 30 stopni Celsjusza przez godzinę.
Po godzinie przenieś kulturę do 50-mililitrowych probówek wirówkowych. Zebrać komórki z kultury przez odwirowanie w temperaturze 9000 razy G przez dwie minuty w temperaturze czterech stopni Celsjusza. Następnie wyrzuć supernatant i natychmiast zamroź osad w ciekłym azocie.
Następnie przechowuj go w temperaturze minus 80 stopni Celsjusza do czasu użycia.