JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:14 min • October 30th, 2025
Zacznij od sterylnego ekstraktu drożdżowego Todda-Hewitta lub płytki agarowej THY, bogatego w składniki odżywcze podłoża, które wspomaga wzrost Streptococcus mitis, patogennej bakterii.
Za pomocą sterylnej pętli pokryj płytkę szczepem bakteryjnym.
Umieść zaszczepioną płytkę w słoiku ze świecą, zapal świecę, szczelnie zamknij słoik i inkubuj.
Paląca się świeca zużywa tlen i zwiększa poziom dwutlenku węgla, tworząc środowisko mikroaerofilowe, które naśladuje warunki podobne do gospodarza.
Składniki odżywcze w pożywce i mikroaerofilne środowisko słoika zwiększają namnażanie się bakterii i sprzyjają rozwojowi fenotypu zjadliwości.
Po inkubacji zdjąć pokrywkę słoika i wyjąć płytkę.
Za pomocą sterylnej pętli wybierz pojedynczą izolowaną kolonię i przenieś ją do sterylnej stożkowej probówki zawierającej bulion THY.
Inkubuj kulturę w warunkach statycznych, aby wspomóc wzrost bakterii przy jednoczesnym zachowaniu fenotypu wirulencji.
Kultura ta może być wykorzystana jako model patogenny do badania interakcji gospodarz-patogen.
Przed przygotowaniem paciorkowców z grupy Mitis należy ogrzać płytki agarowe THY w inkubatorze do temperatury 37 stopni Celsjusza.
Następnie użyj sterylnej pętli, aby usunąć pożądane szczepy Streptococci na płytkach.
Następnie umieść talerze w słoiku ze świecą i inkubuj słoik w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez noc przez około 18 godzin, aby zapewnić środowisko mikroaerofilne.
Następnego dnia wyjmij talerze ze słoika ze świecą i użyj sterylnej pętli, aby wybrać izolowane kolonie.
Zaszczepić 15 mililitrów sterylnych stożkowych probówek zawierających 2 mililitry bulionu THY.
Zamknij szczelnie nakrętki i inkubuj probówki w temperaturze 37 stopni Celsjusza w warunkach statycznych.