JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:51 min. • October 30th, 2025
Zacznij od nietypizowanego szczepu Haemophilus influenzae , patogenu ludzkich dróg oddechowych.
Umieść kulturę bakteryjną na bogatych w składniki odżywcze selektywnych pożywkach i inkubuj ją w warunkach wzbogaconych w CO2, aby naśladować środowisko dróg oddechowych.
Podczas inkubacji bakterie wykorzystują składniki odżywcze i namnażają się, tworząc kolonie.
Przenieś kolonię do selektywnej płynnej pożywki i inkubuj, aby pobudzić wzrost bakterii w płynnej kulturze.
Przenieść podwielokrotność do probówki do mikrowirówki.
Odwirować w celu oddzielenia bakterii i wyrzucić supernatant.
Ponownie zawiesić bakterie w buforze, ponownie odwirować w celu umycia i oddzielenia bakterii, a następnie wyrzucić pozostałości supernatantu zawierającego pożywkę.
Ponownie zawiesić bakterie w buforze i rozcieńczyć.
Za pomocą spektrofotometru zmierz gęstość optyczną przy 600 nm, aby oszacować stężenie bakterii.
Rozcieńczoną kulturę bakteryjną należy umieścić na selektywnych pożywkach i inkubować w celu utworzenia kolonii.
Policz kolonie, aby obliczyć jednostki tworzące kolonie w celu przygotowania inokulum do wykorzystania w przyszłości.
Ułóż NTHI na czekoladowym talerzu agarowym. Inkubuj płytkę do góry nogami przez noc w temperaturze 37 stopni Celsjusza z 5% dwutlenkiem węgla. Następnego dnia posadź bakterie w bulionie do infuzji mózgowo-sercowej.
Następnie w probówce do mikrowirówki dodaj jeden mililitr bulionu. Wiruj mieszaninę w temperaturze 4 000 g przez pięć minut w temperaturze pokojowej. Następnie wyrzucić supernatant i ponownie zawiesić osad w jednym mililitrze PBS. Powtórz ten krok prania jeszcze raz.
Następnie rozcieńczyć 100 mikrolitrów zawieszonego roztworu w 900 mikrolitrach PBS i zmierzyć absorbancję kultury przy 600 nanometrach. Skorzystaj z tych informacji, aby dostosować inokulum do 20 milionów jtk na mililitr.
Następnie określ żywotność i CFU inokulum. Hoduj od jednego do dziesięciu seryjnych rozcieńczeń bulionu na czekoladowych płytkach agarowych i inkubuj płytki przez noc.