JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:17 min • October 30th, 2025
Zacznij od uśpionej myszy z odsłoniętą tchawicą. Płuca myszy były wstępnie zakażone nietypizowaną bakterią Haemophilus influenzae, bakterią chorobotwórcze.
Wprowadzić cewnik do tchawicy i podłączyć go do strzykawki wypełnionej buforem do płukania.
Podawać bufor płuczący zawierający antykoagulant zapobiegający tworzeniu się skrzepów krwi i cukier w celu zachowania integralności komórek.
Delikatnie zassać, aby odzyskać płyn z płukania oskrzelowo-pęcherzykowego zawierający czerwone krwinki, komórki odpornościowe i resztkowe patogeny.
Powtórzyć procedurę i zebrać odzyskany płyn z płukania w jednej zawiesinie.
Pobrać podwielokrotność z zebranej zawiesiny i odwirować w celu oddzielenia komórek. Odrzucić supernatant.
Ponownie zawiesić komórki w buforze do lizy, aby selektywnie lizować czerwone krwinki.
Odwirować w celu oddzielenia pozostałych komórek i wyrzucić supernatant zawierający zanieczyszczenia.
Ponownie zawieś pozostałe komórki w buforze.
Końcowa zawiesina, zawierająca komórki odpornościowe i resztki bakterii, jest gotowa do dalszej analizy.
Odsłoń brzuszną część płuca, aby uzyskać dostęp do tchawicy. Zaintubuj tchawicę za pomocą cewnika o rozmiarze 20.
Za pomocą cewnika wkroplić 0,8 mililitra buforu BALF i zebrać płukanie przez aspirację dentystyczną. Powtórz tę procedurę jeszcze trzy razy, łącząc cztery kolekcje płukania w jedną zawiesinę.
Weź podwielokrotność 100 mikrolitrów i wiruj przez dwie minuty z prędkością 2,000 obr./min.
Usunąć supernatant i ponownie zawiesić w buforze do lizy RBC. Zakręć nim i ponownie zawieś granulkę za pomocą 1X PBS.