Synchronizacja kultur sinic i zagęszczenie DNA napędzane przez cykle światło-ciemność

0 wyświetleń3:17 min • October 30th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zacznij od bogatej w składniki odżywcze płytki agarowej uzupełnionej tiosiarczanem.

Smugi cyjanobakterii i inkubuj je na przemian w okresach jasnych i ciemnych, aby utrzymać cykl okołodobowy.

W okresie świetlnym pobieranie składników odżywczych i tiosiarczan wspomaga rozwój bakterii i kondensację DNA.

W ciemnym okresie komórki oszczędzają energię i dzielą się.

Naprzemienny cykl światła i ciemności synchronizuje komórki na tym samym etapie wzrostu i podziału.

Po okresie świetlnym dodaj kilkakrotnie roztwór sacharozy i pipet, aby uwolnić sinice, powodując zmianę koloru. Przenieś komórki do probówki.

Dodaj barwnik fluorescencyjny specyficzny dla DNA i inkubuj w ciemności. Barwnik wiąże się z DNA sinicy.

Odwirować w celu oddzielenia sinic i usunięcia supernatantu.

Zawiesić cyjanobakterie w roztworze sacharozy, przenieść zawiesinę na szkiełko i przykryć.

Pod mikroskopem fluorescencyjnym niebieskie skondensowane DNA w komórkach potwierdza zsynchronizowany, regulowany przez okołodobowy postęp cyklu komórkowego sinicy.

Zacznij od hodowli sinic na dziewięciocentymetrowych, wysterylizowanych płytkach BG-11 zawierających 1,5% agaru i 0,3% tiosiarczanu sodu. Inkubuj płytki w temperaturze 23 stopni Celsjusza w cyklu świetlnym 12-12 z 50 mikro-E światła na metr kwadratowy na sekundę. Aby utrzymać komórki, co tydzień przenoś je na świeże płytki agarowe BG-11.

W ciągu tygodnia kultury pojawiają się jako zielone paski. Przenieś zielone grudki komórek za pomocą wysterylizowanej płomieniowo pętli i rozłóż je na nowej płytce. Aby zaobserwować zagęszczenie DNA, należy zebrać komórki hodowane przez sześć dni pod koniec okresu świetlnego.

Aby uwolnić komórki z płytki, dodaj jeden mililitr 0,2-molowej sacharozy. Następnie zebrać zawiesinę komórkową i powtarzać dodawanie i usuwanie sacharozy, aż roztwór zmieni kolor na zielony. Zmiana koloru wskazuje, że większość komórek została zwolniona.

Teraz przenieś 500 mikrolitrów roztworu zawieszonych komórek do probówki Microfuge i dodaj barwnik Hoechst, aby uzyskać końcowe stężenie jednego mikrograma na mililitr. Następnie pozwól komórkom inkubować w ciemności przez 10 minut. Następnie odwiruj komórki, wyrzuć supernatant i zawieś je ponownie w 10 mikrolitrach 0,2-molowej sacharozy.

Następnie przenieść jeden mikrolitr zawiesiny na szkiełko podstawowe, założyć szkiełko nakrywkowe i obserwować komórki pod mikroskopem fluorescencyjnym wyposażonym w filtr UV. Używając obiektywu 100-krotnego zanurzenia w olejku, poszukaj dowodów na zagęszczenie DNA, które powinny być widoczne w większości komórek.

10:57

Eksperymentalny protokół wykrywania sinic w próbkach ciekłych i stałych za pomocą chipa mikromacierzy przeciwciał

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:51

Optogenetyka Identyfikacja typu neuronalnego za pomocą szklanej optrody u obudzonych myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:37

Fermentacja kontrolowana światłem do produkcji mikrobiologicznej, chemicznej i białkowej

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

02:01

Przygotowanie kultury sinic do produkcji biomasy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:02

Synchronizacja Caulobacter crescentus w celu zbadania cyklu komórkowego bakterii

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

11:13

Projekt i wdrożenie zautomatyzowanego systemu oświetlenia, hodowli i pobierania próbek do zastosowań optogenetycznych drobnoustrojów

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:47

Wizualizacja zagęszczenia DNA u sinic za pomocą wysokonapięciowej krioelektronowej tomografii

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:25

Modyfikacja genetyczna cyjanobakterii przez koniugację przy użyciu modułowego zestawu narzędzi do klonowania CyanoGate

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

05:21

Obsługa fotobioreaktorów laboratoryjnych z pomiarami wzrostu online i konfigurowalnymi reżimami oświetlenia

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

06:26

Izolacja i charakterystyka nienaruszonego fikobilisomu u cyjanobakterii

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 15 sierpnia 2026