Synteza stabilizowanych nanodyskami antygenów białek błonowych przy użyciu systemu bezkomórkowego

Weźmy system bezkomórkowy bakteryjny, który nie ma nienaruszonych struktur komórkowych, ale zachowuje składniki molekularne niezbędne do transkrypcji i translacji in vitro .

Wprowadź plazmidy kodujące antygen białka błonowego i białko rusztowania, a także syntetyczne fosfolipidy i polimery.

Uzupełnij mieszaninę o ATP, GTP i mieszankę aminokwasów, aby zainicjować syntezę białek.

Jednocześnie należy przygotować roztwór paszowy wzbogacony o mieszankę aminokwasów.

Załadować mieszaninę do komory wewnętrznej, a roztwór zasilający do komory zewnętrznej dwukomorowego urządzenia do dializy.

Podczas inkubacji substraty dyfundują z komory zewnętrznej do wewnętrznej przez błonę półprzepuszczalną, ułatwiając transkrypcję plazmidu i translację białek.

Białko rusztowania składa fosfolipidy i polimery w nanodyski lipidowe i ułatwia fałdowanie i włączanie MPA do tych struktur.

Produkty uboczne powstające podczas reakcji dyfundują do komory zewnętrznej, utrzymując optymalne warunki do tworzenia się MPA stabilizowanego nanodyskami.

Przygotuj MOMP-tNLP, stosując metodę bezkomórkową.

Rozmrozić bufor do rozpuszczenia z zestawu do ekspresji białek bezkomórkowych na dwie godziny przed rozpoczęciem reakcji i dodać