Western blot do oceny integralności strukturalnej bakteryjnego antygenu szczepionkowego

Weź żel SDS-PAGE zawierający prążki białkowe z cząstek białka błonowego i nanolipoproteiny. Kompleksy te przenoszą oligomeryczne białko błonowe Chlamydia lub MP, obiecujący antygen szczepionkowy przeciwko zakażeniu Chlamydią .

Jako kontrolę należy użyć prążków białkowych z oczyszczonego oligomerycznego MP.

Zmontuj żel, membranę western blot i elementy bibuły w suchym systemie bibuły.

Zastosuj prąd elektryczny, aby przenieść rozwiązane białka na błonę.

Usunąć błonę i inkubować ją w buforze zawierającym detergenty i przeciwciała pierwszorzędowe.

Detergenty blokują niespecyficzne miejsca interakcji, podczas gdy pierwszorzędowe przeciwciała są skierowane przeciwko MP.

Umyj błonę, aby usunąć niezwiązane przeciwciała pierwszorzędowe.

Inkubować z przeciwciałami drugorzędowymi sprzężonymi z fluoroforem skierowanymi na przeciwciała pierwszorzędowe.

Umyj membranę, aby usunąć nadmiar przeciwciał drugorzędowych.

Przechwytywanie obrazów fluorescencyjnych membrany.

Pasma molekularne pasujące do kontrolnego oligomerycznego MP potwierdzają integralność strukturalną MP w kompleksach, wspierając jego potencjał antygenowy.

Rozpuścić próbki za pomocą SDS-PAGE i przenieść stosy żeli za pomocą komercyjnego system