Przygotowanie i przemiana bakterii za pomocą elektroporacji wysokonapięciowej

Zacznij od probówki zawierającej bakterie zaszczepione w pożywce.

Inkubować z potrząsaniem, aż komórki osiągną fazę aktywnego podziału.

Odwirować w celu zebrania komórek i odrzucenia supernatantu.

Wielokrotnie myj komórki lodowatym glicerolem w celu usunięcia soli i ponownie zawieś w glicerol, aby utrzymać żywotność komórek.

Przygotuj plazmid zawierający gen oporności na antybiotyki w sterylnej wodzie z EDTA, aby zapobiec degradacji DNA.

Wymieszaj roztwór plazmidu z komórkami bakteryjnymi.

Zastosuj krótki impuls o wysokim napięciu, aby tymczasowo utworzyć pory w błonie bakteryjnej.

Dzięki temu plazmidowe DNA może dostać się do cytoplazmy.

Natychmiast przenieść komórki do pożywki regeneracyjnej i inkubować z potrząsaniem.

Składniki pożywki wspomagają naprawę błony i ekspresję genów oporności na antybiotyki kodowaną przez plazmid.

Rozłóż komórki na agarze odżywczym zawierającym antybiotyk i inkubuj, aż utworzą się kolonie.

Wybierz pojedynczą kolonię i rozłóż ją na świeżym talerzu, aby oczyścić transformanty.

Aby rozpocząć eksperyment, należy przygotować elektrokompetentne komórki 10 największych szczepów E. coli .

Przenieś pojedynczą kolonię do jednego mililitra pożywki LB. Inkubować probówkę w t