Mechaniczne zakłócenia poszczególnych robaków w celu oceny zmienności interakcji gospodarz-bakteria

Zacznij od dopasowanych do wieku, sterylnych, świeżo zabitych dorosłych robaków C. elegans z przepuszczalnymi skórkami, zawieszonymi w buforze.

Robaki te są zakażone bakteriami w przewodzie pokarmowym.

Weź płytkę z głęboką studnią zawierającą cząstki ścierne w buforze i przenieś pojedynczego robaka do każdej studzienki.

Przykryj płytkę folią uszczelniającą i pokrywką.

Inkubuj płytkę w niskiej temperaturze, aby zapobiec przegrzaniu podczas rozerwania tkanki.

Naciśnij pokrywę, aby uszczelnić studzienki.

Za pomocą środka zaburzającego tkanki mechanicznie potrząśnij płytką. Cząsteczki ścierne niszczą tkanki robaków, uwalniając bakterie jelitowe.

Postukaj w płytkę i odwiruj ją, aby granulować zawartość.

Wymieszaj zawartość, aby równomiernie rozprowadzić bakterie, a następnie przenieś je do świeżych studzienek.

Zawiesinę bakteryjną należy rozcieńczyć seryjnie w buforze.

Rozcieńczenia należy rozłożyć na płytkach agarowych i inkubować, aby umożliwić utworzenie kolonii.

Policz kolonie, aby określić ilościowo różnice w obciążeniu bakteryjnym jelit u poszczególnych robaków.

Aby przygotować się na mechaniczne rozerwanie robaków, zaopatrz się w sterylną dwumililitrową płytkę 96-dołkową i osłonę płytki sili