Kwantyfikacja polarności i dynamiki składnika układu wydzielania u Legionella pneumophila

Zacznij od Legionella pneumophila, patogenu układu oddechowego wykazującego ekspresję fluorescencyjnie znakowanego składnika systemu wydzielania wymaganego do zakażenia gospodarza.

Aby określić ilościowo polaryzację tych składników, uzyskaj obrazy fluorescencyjne i dostosuj kontrast, aby odróżnić poszczególne komórki.

Umieść prostokątne obszary od bieguna komórki w kierunku cytoplazmy, aby zmierzyć gradienty fluorescencji.

Zamaskuj te obszary, aby wyodrębnić średnią intensywność i wariancję, a następnie oblicz wyniki polaryzacji jako stosunek wariancji do średniej intensywności.

Wysokie wyniki polaryzacji wskazują na ukierunkowaną rekrutację składników na biegunach bakteryjnych.

Aby uzyskać dynamiczne pomiary, zrób dwa zdjęcia poklatkowe i dostosuj kontrast, aby wyraźnie zwizualizować komórki.

Umieść kwadratowe obszary w środku komórki, aby zmierzyć fluorescencję cytozolową.

Maskuj całe komórki, aby skorygować fotowybielanie i zdefiniuj obszary tła między komórkami w celu odjęcia szumu.

Eksportuj wszystkie intensywności i oblicz zmianę fluorescencji w czasie.

Zwiększona intensywność wskazuje na grupowanie, podczas gdy zmniejszona intensywność odzwierciedla dynamiczną redystrybucję składnikó