JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:48 min. • October 30th, 2025
Weź probówkę zawierającą kulturę Vibrio natriegens, szybko rosnącej bakterii.
Odwirować kulturę, aby osadzać bakterie. Odrzucić sklarowany osad zawierający pozostałą pożywkę.
Zawiesić osad bakteryjny w świeżej pożywce i przenieść go do kolby stożkowej zawierającej tę samą pożywkę do przygotowania hodowli bakteryjnej.
Inkubuj kulturę, wstrząsając w napowietrzonych warunkach.
Ze względu na krótki czas generacji, Vibrio natriegens wykorzystuje składniki odżywcze i szybko się dzieli, aby wytworzyć skoncentrowaną populację bakterii.
Za pomocą spektrofotometru regularnie monitoruj gęstość optyczną (OD) w celu określenia stężenia bakterii.
Hoduj kulturę, aż OD osiągnie około jednego, co wskazuje na wykładniczą fazę wzrostu o wysokiej aktywności metabolicznej.
Przenieś kulturę do probówek wirówkowych.
Odwirować w niskiej temperaturze, aby oddzielić bakterie przy zachowaniu integralności komórkowej.
Umieścić probówkę na lodzie i usunąć supernatant zawierający resztki komórkowe.
Przechowuj osad bakteryjny w bardzo niskiej temperaturze do dalszej analizy.
Na początek umyj jeden mililitr nocnej kultury Vibrio natriegens , odwirowując ją w wirówce stołowej z prędkością 10 600 g przez jedną minutę.
Odessać supernatant bez naruszania osadu i ponownie zawiesić w jednym mililitrze świeżej pożywki LB-V2. Zaszczepić jeden mililitr przemytej kultury przez noc do jednego litra świeżej pożywki wzrostowej LB-V2 w autoklawowanej 4-litrowej kolbie Erlenmeyera z przegrodą i sterylną pokrywą, aby uzyskać stosunek rozcieńczenia od jednego do tysiąca. Uprawiaj kulturę w temperaturze 30 stopni Celsjusza, wstrząsając z prędkością 225 obr./min.
Użyj spektrofotometru, aby monitorować OD 600 w kulturze, a gdy osiągnie 1,0 plus minus 0,2, zbierz kulturę, odwirowując ją w dwóch 500-mililitrowych probówkach o masie 3500 razy g przez 20 minut w czterech stopniach Celsjusza, a następnie umieść na lodzie. Odessać supernatant i natychmiast przetworzyć osad.