JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 4:37 min. • October 30th, 2025
Weźmy kulturę Phormidium lacuna, nitkowatego cyjanobakterii.
Homogenizuj kulturę, aby rozproszyć włókna, a następnie odwiruj, aby osadzać bakterie.
Odrzucić supernatant i ponownie zawiesić osad w pożywce bogatej w składniki odżywcze.
Dodaj plazmidowe DNA zawierające białko zielonej fluorescencji i geny oporności na antybiotyki na płytkę agarową uzupełnioną antybiotykami.
Dodaj zawiesinę bakteryjną na DNA i inkubuj w warunkach świetlnych.
Bakterie internalizują DNA za pomocą pilusów typu IV. Wprowadzone geny integrują się z jedną z wielu kopii genomu bakteryjnego.
Rozprowadź bakterie na płytce agarowej uzupełnionej antybiotykiem, aby wybrać przekształcone bakterie.
Pod mikroskopem świetlnym zidentyfikuj zdrowe, zielone włókna wskazujące na udaną transformację.
Przenieś wybrane filamenty do płynnych pożywek o wyższym stężeniu antybiotyku, aby wzbogacić przekształconą populację.
Ponownie umieść je na agarze z wyższymi poziomami antybiotyków w celu segregacji transformantów.
Wizualizacja ekspresji GFP pod mikroskopem fluorescencyjnym, aby potwierdzić udaną transformację.
Zacznij od zaszczepienia 50 mililitrów płynnej pożywki F2 do każdej z dwóch 250-mililitrowych kolb jednym mililitrem włókien P.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych