Modelowanie udaru u myszy - niedrożność tętnicy środkowej mózgu za pomocą modelu filamentu

Ogólnym celem tej procedury jest stworzenie mysiego modelu ogniskowego niedokrwienia mózgu poprzez zablokowanie środkowej tętnicy mózgowej nicią śródświetlną. Osiąga się to poprzez wykonanie nacięcia szyi w linii środkowej i uwidocznienie wspólnej tętnicy szyjnej. Następnym krokiem jest zawiązanie ligatur wokół tętnicy szyjnej wspólnej, a zaciski tętnicy szyjnej zewnętrznej służą do utrzymania ich na miejscu i zapobiegania krwawieniu.

Ostatnim etapem zabiegu jest wprowadzenie filamentu do koła Willisa. Blokuje to gałąź tętnicy środkowej mózgu, ostatecznie deficyty neurologiczne. W wyniku tego okluzję można zidentyfikować poprzez obserwację zmian w zachowaniu.

Jedną z głównych zalet proksymalnej okluzji MCA za pomocą techniki filamentu jest to, że oferuje ona wysoce powtarzalne zmiany w warstwie i korze mózgowej. Niedokrwienie może być stosowane na stałe i przejściowo, a ponadto, ponieważ nie wymaga kraniektomii nitkowatej, okluzję MCA można uznać za mniej lub bardziej nieinwazyjną. Ogólnie rzecz biorąc, osoby początkujące w tej metodzie zmagają się z delikatną naturą technik mikrochirurgicznych Przed zabiegiem przygotuj włókno, tnąc pod mikroskopem włókno nylonowe 8.0 na 11 milimetrów długości.

Końcówka filamentu musi być całkowicie i równomiernie pokryta na długości ośmiu milimetrów mieszanką krzemu, w celu uzyskania optymalnych rezultatów zaleca się stosowanie standardowych procedur operacyjnych. Rodzaj użytej myszy zależy od celu badania. Ogólnie rzecz biorąc, myszy powinny być starsze niż 10 tygodni.

Stosuj odpowiednie środki znieczulające w porozumieniu z personelem weterynaryjnym. Temperatura ciała myszy jest utrzymywana na poziomie około 36,5 stopni Celsjusza podczas operacji za pomocą płytki grzewczej, przygotowuje miejsce operacji, dezynfekuje skórę i otaczającą sierść i pozostawia do wyschnięcia. Wykonaj nacięcie w linii środkowej wzdłuż szyi i delikatnie rozsuń tkanki miękkie.

Lewa tętnica szyjna wspólna jest starannie preparowana, wolna od otaczających nerwów bez uszkadzania nerwu błędnego, a podwiązanie wykonuje się za pomocą szwu od 5,0 do 7,0. Następnie odizoluj lewą tętnicę szyjną zewnętrzną i zawiąż drugi węzeł. Po odizolowaniu lewej tętnicy szyjnej wewnętrznej luźno zawiąż wokół niej węzeł.

Używając filamentu 6.0, węzeł zostanie zaciśnięty w dalszej części procedury. Po uzyskaniu dobrego widoku lewej tętnicy szyjnej wewnętrznej i lewej tętnicy podniebiennej, obie tętnice, EC przycięte w celu przygotowania do wprowadzenia filamentu. W tętnicy szyjnej wspólnej wycina się mały otwór przed jej rozwidleniem.

Przygotowaną wcześniej żyłkę wprowadza się następnie do tętnicy. Odcięte tętnice są otwierane, podczas gdy włókno jest wprowadzane do tętnicy szyjnej wewnętrznej. Aby zamknąć tętnicę środkową mózgu, zamyka się trzeci węzeł na tętnicy szyjnej wewnętrznej.

Aby zamocować filament na miejscu, nałóż miejscowo żel lidokainowy na ranę w celu złagodzenia bólu. W przypadku operacji pozorowanych włókno jest natychmiast wkładane i wyjmowane, aby umożliwić natychmiastową reperfuzję, i natychmiast wycofywane, aby umożliwić natychmiastową reperfuzję, podaje się podskórnie 0,5 mililitra soli fizjologicznej jako uzupełnienie objętości. Aby zbadać efekty reperfuzji, otwórz trzeci węzeł i wyjmij włókno.

Określony czas po niedokrwieniu, zwykle po 30 do 60 minutach. W tym przykładzie reperfuzja jest dozwolona 60 minut po złudzeniu okluzji, podaj drugą objętość uzupełniającą zastrzyk soli fizjologicznej. Na koniec skróć pozostałe szwy i zamknij skórę szwem chirurgicznym.

Umieść zwierzęta w ogrzewanej klatce na dwie godziny, aby doszły do siebie po operacji, codziennie sprawdzaj zwierzęta pod kątem oznak dyskomfortu. Po operacji może dojść do utraty wagi, a myszom należy zapewnić puree z pokarmu umieszczonego na szalce Petriego na podłodze. Aby zachęcić do jedzenia.

Karma jest wymieniana codziennie przez siedem dni. Czas trwania ograniczenia przepływu krwi może prowadzić do różnic w deficytach motorycznych i behawioralnych. Po 30 lub 60 minutach niedokrwienia mózgu większość zwierząt wykazuje zmniejszoną odporność.

S późniejsze pchanie i krążenie z powodu zaburzeń lokomocji, łagodniejsze zmiany objawiają się pozycją zginacza kończyn przednich. Te łatwe do zaobserwowania znaki mogą być wykorzystane jako podstawowy wynik dla powodzenia operacji. Powstałą zmianę można ocenić za pomocą badania histologicznego lub rezonansu magnetycznego.

Jak widać tutaj, 60-minutowa niedrożność tętnicy środkowej mózgu powoduje martwicę tkanek w obszarze obejmującym zarówno prążkowie, jak i prążkowie, podczas gdy 30-minutowe niedokrwienie powoduje głównie śmierć komórek neuronalnych, ograniczoną do prążkowia. Dobrze wyszkoleni chirurdzy MCAO mogą opanować tę technikę w 10 minut. Próbując wykonać tę procedurę, należy pamiętać o przestrzeganiu standardowych procedur operacyjnych, aby zapewnić powtarzalne wyniki i kontrolować czynniki zakłócające.