Pomiary strumienia tlenu w celu oceny oddychania mitochondrialnego w żywych i przepuszczalnych komórkach

Załaduj zawiesinę komórek ssaków do komór respirometrycznych zawierających pożywkę i uszczelnij je korkami, aby stworzyć zamknięty system do pomiaru tlenu.

Czujnik w każdej komorze mierzy strumień tlenu w czasie rzeczywistym, czyli wskaźnik zużycia tlenu w komórkach.

Wstrzyknąć digitoninę przez korki, aby przeniknąć przez błony komórkowe, umożliwiając dyfuzję składników cytozolowych.

Zmniejsza to dostępność substratu dla mitochondrialnego łańcucha transportu elektronów, obniżając strumień tlenu.

Wprowadź pirogronian i jabłczan, które dostają się do mitochondriów i generują nośniki elektronów.

Nośniki te oddają elektrony do kompleksów I i II ETC, inicjując transfer elektronów i zwiększając strumień tlenu.

Wstrzyknij ADP, aby zainicjować syntezę ATP, co dodatkowo podnosi strumień tlenu.

Następnie stopniowo miareczkować rozprzęgacz, aby zakłócić gradient protonów, maksymalizując strumień tlenu.

Na koniec wstrzyknij antymycynę A, aby zahamować kompleks III, zatrzymując transport elektronów i minimalizując strumień tlenu.

Ten profil strumienia ujawnia oddychanie mitochondrialne w przepuszczalnych komórkach.

Na początek dodaj mitochondrialne podłoże oddechowe MiR05 do czystej komory Oroborosa. Włó