Wysokowydajny test fluorescencjonujący do badania interakcji mikroorganizmów z robakami

Zacznij od rurki zawierającej robaki C. elegans .

Przenieś robaki na wielowarstwową płytkę z bogatym w składniki odżywcze agarozowym medium zawierającym bakterie kontrolne lub testowe.

Podczas inkubacji robaki spożywają bakterie, które kolonizują nabłonek jelit i uwalniają aminokwasy będące źródłem składników odżywczych. Aminokwasy te są metabolizowane do pochodnych aminokwasów i przechowywane w granulatach jelitowych powiązanych z lizosomami.

Następnie dodaj świeży bufor i przenieś robaki na czarną płytkę wielowarstwową.

Dodaj chemiczny czynnik wywołujący stres do każdej studni i uszczelnij płytę.

Włóż płytkę do czytnika płyty fluorescencyjnej i zapisz fluorescencję.

U robaków czynnik stresowy powoduje stres oksydacyjny, który uszkadza komórki nabłonkowe jelit.

Powoduje to pęknięcie granulek jelitowych związanych z lizosomem, uwalniając pochodne aminokwasów, które po ekspozycji na promieniowanie ultrafioletowe fluorescują na niebiesko.

Porównaj fluorescencję robaków wystawionych na bakterie kontrolne i testowe, aby ocenić skuteczność kolonizacji bakterii oraz ich wpływ na reakcję gospodarza na stres oksydacyjny.

Reguluj stężenie robaków do 15 robaków na mikrolitr w stożkowej rurce o pojemn