JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:38 min • November 28th, 2025
Weźmy płytę mikrofluidyczną zawierającą pary studni wejściowych i wyjściowych połączonych kanałami mikrofluidycznymi, które obejmują kanały serpentynowe oraz kanał eksperymentalny.
Aby przygotować kanały, dobrze dodaj media do wyjścia.
Włóż płytkę do etapu płytowego i zabezpiecz ją sterylną pokrywą.
Aktywuj przepływ medium z dołka wyjściowego do wejścia, aby wypłukać wszelkie uwięzione kieszenie powietrzne w kanałach.
Zdejmij płytkę. Usuń resztki z dołka wyjściowego i dodaj hodowlę bakteryjną.
Do wejścia dodaj świeże medium, aby zapobiec cofaniu się powietrza. Umieść talerz z powrotem na scenie.
Podczas obserwacji pod mikroskopem wznowi przepływ, aby wciągnąć komórki do kanału eksperymentalnego.
Dostosuj przepływ, aby zapobiec przedostawaniu się komórek do kanałów serpentynowych i zapobiec zatkaniom.
Zatrzymaj przepływ i wysiądź, aby ułatwić przyczepienie bakterii.
Usuń płytkę i wyrzuć pozostałe kultury bakteryjne oraz podłoże.
Bakterie znajdujące się w mikrofluidycznej płycie są teraz gotowe do dalszych eksperymentów.
Do gruntowania najpierw wyjmij z opakowania płytkę mikrofluidyczną z 48 dołków, nie dotykając powierzchni szkła na dnie płyty, a szkiełko na dnie wyczyść chusteczką soczewkową. Aby zaparować kanały mikrofluidyczne, pipetować 200 mikrolitrów minimalnego medium o temperaturze 37 stopni Celsjusza do studni wyjściowej, uważając na unikanie powstawania pęcherzyków. Następnie umieść talerz na etapie talerza.
Przetrzyj interfejs etanolem, uszczelniając go na płycie po wyschnięciu etanolu. W trybie manualnym modułu sterującego ustaw płyn jako bulion Luria-Bertani na 37 stopni Celsjusza, a maksymalny prześwięty na pięć dyne na centymetr kwadratowy. Kliknij na otwory wyjściowe, aby aktywować przepływ z wyjścia do wejścia i przygotować kanały.
Po pięciu minutach zatrzymaj przepływ, aby przygotować się do siewu, i ostrożnie usuń talerz ze sceny. Następnie aspiruj wszelkie pozostałe medium z odwiertu wyjściowego, nie usuwając żadnego medium z wewnętrznego okręgu prowadzącego do kanałów mikrofluidycznych. Aby zasiać kanały eksperymentalne, należy dodać 300 mikrolitrów minimalnego medium do dołka wejściowego, a następnie dodać 300 mikrolitrów kultury bakterii do dołka wyjściowego.
Wróć płytę do etapu obrazowania, upewniając się, że przetrzyj interfejs etanolem przed położeniem na płytę, i użyj transmisji z kamery na żywo, aby ustawić ostrość na jednym kanale. Podczas wizualnego monitorowania podania na żywo wznowić przepływ z częstotliwością 1 do 2 dyne na centymetr kwadratowy przez około 2 do 4 sekund, aby komórki mogły wejść do kanału eksperymentalnego, ale nie do kanałów serpentynowych, i pozostawić płytę na stopniu kontrolowanym temperaturą przez godzinę, aby ogniwa mogły się przyłączyć. Po zakończeniu okresu przyczepienia ostrożnie wyjmij płytkę ze sceny i zasysaj bakterie z odwiertu wylotowego, nie zakłócając kanału.
Następnie użyj nowej końcówki pipety, aby usunąć medium z wejścia.