Ekstrakcja bakterii apoplastycznych za pomocą metody ciśnieniowej opartej na strzykawkach

Weźmy roślinę Arabidopsis z liśćmi wcześniej zaszczepionymi bakteriami, aby zbadać interakcje roślin-mikroorganizmy.

Bakterie te rozmnażają się w apoplastach, czyli przestrzeni międzykomórkowej między komórkami roślinnymi, tworząc mikrokolonie.

Gdy kolonizacja apoplastyczna zostanie ustalona, usuń liście i umieść je w bezigłowej strzykawce.

Dodaj wodę destylowaną, aby pokryć tkankę.

Włóż tłok, następnie trzymaj strzykawkę pionowo, stuknij w nią i wyreguluj tłok, aby uwolnić uwięzione powietrze.

Uszczelnij końcówkę parafilmem, aby stworzyć zamkniętą komorę do ekstrakcji apoplastów.

Należy przystosować dodatnie ciśnienie, naciskając tłok, aż tkanka stanie się ciemna, co oznacza ucisk i przedostanie się wody do przestrzeni międzykomórkowej, aby usunąć bakterie.

Następnie przystosuj podciśnienie, pociągając tłok, aby rozszerzyć matrycę tkanek i wyciągnąć płyn oraz bakterie.

Powtarzaj cykle ciśnienia, aby wygenerować siły ścinające, które zakłócają mikrokolonie, uwalniając bakterie bez uszkadzania tkanek roślinnych.

Odszczelnij strzykawkę i pobierz płyn apoplastyczny zawierający rozproszone bakterie do dalszej analizy.

Cztery dni po szczepieniu odetnij albo część powietrzną rośliny Arabidopsis ,