Izolacja endospor z próbki środowiskowej poprzez celowaną lizę komórek wegetatywnych

Pobierz próbkę środowiskową zawierającą komórki wegetatywne i endospory bakterii tworzącej endospory, a także inne bakterie.

Endospory mają ochronną powłokę, która pomaga im przetrwać w trudnych warunkach.

Używając jednostki filtracji próżniowej, przefiltruj próbkę, aby uwięzić komórki i endospory na membranie.

Włóż membranę do misy i pokrój na małe kawałki.

Przełóż kawałki do probówki, dodaj bufor i porusz rurkę, aby uwolnić komórki i endospory.

Inkubuj z mieszaniem w wysokiej temperaturze, aby osłabić struktury komórkowe wegetatywne bez uszkadzania endospor.

Schłodź próbkę, następnie dodaj lizozym i inkubuj z mieszanką. Lizozym zakłóca ścianę komórkową komórek wegetatywnych, powodując ich pęknięcie.

Dodaj wodorotlenek sodu i detergent, a następnie inkubuj, aby rozkładać makrocząsteczki komórkowe i zanieczyszczenia, jednocześnie zachowując odporne endospory.

Przefiltruj próbkę, aby wyizolować endospory. Przemyj endospory, aby usunąć nadmiar odczynników, przygotowując je do dalszej analizy.

Po przygotowaniu jednostki filtracyjnej i pompy próżniowej zgodnie z protokołem tekstowym, użyj wypalonych kleszczy z ogniem etanolu, aby dodać sterylną membranę nitrocelulozową do jednostki filtracyjnej