JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:08 min. • November 28th, 2025
Zacznij od zamrożonego zapasu bakterii.
Użyj sterylnej pętli inokulacyjnej, aby rozmazać zamrożone bakterie na płytkę z agarem odżywczym. Inkubuj odwróconą płytkę, aby zapobiec kondensacji wody na powierzchni agaru.
Bakterie wykorzystują składniki odżywcze, rosną na powierzchni agaru i tworzą wyraźne, widoczne kolonie.
Wybierz jedną kolonię i zaszczep ją w płynnym podłożu zawierającym składniki odżywcze, aby rozpocząć naturalną hodowlę.
Inkubuj rurkę w warunkach intensywnego wstrząsania.
Wstrząsanie utrzymuje napowietrzanie w rurce i utrzymuje komórki w zawieszeniu, zapobiegając ich osiadaniu na dnie.
Zapewnia to również równomierne rozłożenie składników odżywczych w podłożu, wspierając wykładniczy wzrost bakterii.
Skutkuje to gęstą, metabolicznie aktywną zawiesiną bakteryjną.
Kultura bakteryjna w ciekłym medium jest już gotowa do dalszych eksperymentów.
Aby użyć bulionu, z sterylną pętlą inokulacyjną, usuń niewielką ilość zamrożonego bulionu i rozmazuj bakterie, aby uzyskać pojedyncze kolonie na płytkach agarowych LB.
Inkubuj płytki od pokrywy do dołu przez 12-16 godzin w temperaturze 37 stopni Celsjusza. Zdobądź wcześniej przygotowany tanier. Zaszczep 4 mililitry płynnego bulionu LB w sterylnej tubce hodowli 10 mililitrów z jedną kolonią, dotykając powierzchni pojedynczej kolonii sterylizowaną pętlą i przenosząc ją do płynnego bulionu. Następnie inkubuj hodowlę z aeracją w inkubatorze shakerowym o prędkości 225 obr./min przez 12-16 godzin w temperaturze 37 stopni Celsjusza.