JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 1:59 min. • November 28th, 2025
Zacznij od nocnych hodowli szczepów Vibrio cholerae , patogennych bakterii hodowanych w bogatym w składniki odżywcze.
Wiruj hodowle, aby rozpylić komórki. Usuń supernatant zawierający związki zewnątrzkomórkowe i ponownie zawiesij pellet w soli fizjologicznej.
Następnie zanurz sterylny drut inokulator w hodowli i wbij go pionowo w agar o ruchowości, aby zdeponować bakterie pod powierzchnią bez rozprzestrzeniania się bocznie.
Sterylizuj inokulator ogniem między szczepami, aby zapobiec zanieczyszczeniu krzyżowemu.
Inkubuj płytkę, aby umożliwić bakteriom migrację przez agar o ruchowości.
Agar zawiera chlorek triphenyltetrazolu, czyli TTC, wskaźnik redoks, który po redukcji przez komórki metabolicznie zmienia kolor na czerwony.
Szczepy ruchome redukują TTC na dużym obszarze, tworząc dużą czerwoną strefę, podczas gdy szczepy nieruchome wykazują przebarwienia ograniczone do linii stabilizacji.
Wielkość i rozprzestrzenienie czerwonych stref wskazują ruchliwość każdego szczepu.
Przemyj granulki komórkowe uzyskane z nocnej hodowli. Inokuluj płytki agarowe o ruchowości, wkładając nakłucie inokulujące do wymytej kultury płynnej i wbijając pionowo w medium.
Upewnij się, że kłucie szczepiące nie wygina się podczas kłucia agaru. Między każdym szczepieniem sterylizuj drutowy włóczek za pomocą palnika Bunsena. Inkubuj płytki pokrywką do góry przez 14-24 godziny w temperaturze 37 stopni Celsjusza.
Po 14 godzinach dokładnie monitoruj płytki ruchliwości, aby zapobiec nadmiernemu rozwojowi hodowli.