JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:27 min. • November 28th, 2025
Weźmy oddzielne hodowle bakterii Vibrio cholerae, patogennej bakterii, zawierającej trzy różne biotypy: klasyczną, dziką odmianę El Tor oraz wariant El Tor, z których każdy reprezentuje genetycznie odrębne podgrupy.
Każdą hodowlę zaszczepić w probówkach wypełnionych specjalistycznym medium, aby wykonać test Voges-Proskauer (VP).
Inkubuj poprzez potrząsania, aby ułatwić rozmnażanie bakterii.
Dziki typ El Tor fermentuje glukozę w ośrodku i produkuje acetonę, podczas gdy biotypy klasyczne i wariantowe tego nie robią.
Następnie dodaj α-naftol i wodorotlenek potasu do każdej probówki, dokładnie wymieszaj i inkubuj.
W obecności wodorotlenku potasu tlen atmosferyczny katalizuje utlenianie acetonu do diacetylu.
Diacetyl reaguje ze związkami zawierającymi grupy guanidyny w ośrodku, tworząc różowo-czerwony produkt, którego intensywność jest wzmacniana przez α-naftol.
Rozwój koloru wskazuje na pozytywną reakcję VP, charakterystyczną dla dzikiego typu biotypowego El Tor, podczas gdy biotypy klasyczne i wariantowe nie wykazują formowania kolorów.
Zaszczepić 4 mililitry bulionu Metyl Red Voges-Proskauer lub MR-VP poprzez pipetowanie 10 mikrolitrów wcześniej przygotowanej kultury nocnej do 4 mililitrów bulionu MR-VP w sterylnej tubce hodowli i inkubować z napowietrzaniem w inkubatorze shakerowym przy 225 obr./min przez 12-16 godzin w temperaturze 37 stopni Celsjusza. Następnie należy dodać 150 mikrolitrów 5% masy na objętość alfa-naftolu oraz 50 mikrolitrów wodorotlenku potasu o wartości 40% masy na objętość do 1 mililitra alikwot nocnej hodowli MR-VP w probówkach sterylnych.
Następnie krótko przewijcie rurki. Pozostawić rurki w temperaturze pokojowej do czterech godzin, aż nastąpi zmiana koloru.