JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:09 min. • November 28th, 2025
Weź genetycznie modyfikowaną kulturę E. coli z wyrażeniem operatora tetracykliny chromosomalnej (tetO).
Bakterie te przenoszą także plazmid z promotorem indukowanym przez arabinozą, który napędza ekspresję białka represorowego tetracykliny oznaczonego YFP.
Przełóż hodowlę do wzbogaconego pożywka zawierającego antybiotyki i inkubuj poprzez potrząsanie, aby wybrać komórki zawierające plazmid.
W miarę wzrostu komórek powstają replisomesy, które inicjują replikację chromosomowego DNA.
W fazie wykładniczej zbierz część jako kontrolę nieindukowaną.
Dodaj arabinozą, induktor, do pozostałej kultury i inkubuj obie kultury poprzez potrząsanie nimi.
W hodowli nieindukowanej dimer AraC pozostaje związany z pętlą DNA, hamując ekspresję represorów.
W kulturze indukowanej arabinoza wiąże się z dimerem AraC, indukując ekspresję represorów.
Białka represorowe wiążą się z chromosomalną matrycą tetO, zatrzymując postęp rozwidlenia replikacyjnego.
Użyj mikroskopii fluorescencyjnej, aby obserwować obie hodowle.
Ogniska fluorescencyjne w wywołanej hodowli E. coli potwierdzają blokadę replikacji wywołaną przez białko represorowe.
Do tej procedury stosuje się szczep E. coli z operatorową matrycą tetracyklinową w pla
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych