Dostarczanie biomolekuł fluorescencyjnej do komórek bakteryjnych za pomocą elektroporacji

Zacznij od schłodzonej kuwety zawierającej zawiesinę elektrokompetentnych komórek bakteryjnych, które mają zwiększoną podatność na przepuszczalność błon.

Zawiesina zawiera także biomolekuły oznaczone organicznymi fluoroforami.

Zastosuj impuls elektryczny o wysokim napięciu, aby stworzyć tymczasowe pory błonowe, umożliwiając biomolekułom wejście do cytoplazmy.

Dodaj podłoże bogate w składniki odżywcze i przenieś komórki do rurki. Inkubuj w celu wspomagania naprawy błony.

Wiruj komórki, a następnie odrzucaj supernatant zawierający biomolekuły nieinternalizowane.

Ponownie zawiesić komórki w buforze o wysokiej zawartości soli zawierającym detergent, aby odłączyć biomolekuły przylegające do powierzchni.

Ponownie wiruję w wirówce, wyrzucam supernatant i ponownie zawiesisz komórki w buforze.

Przenieś zawiesinę na filtr i wirówkę, aby usunąć przepływ zawierający biomolekuły nieinternalizowane. Następnie opłucz komórki świeżym buforem i ponownie je zawiesij.

Zamontuj komórki na agarozowej podkładce i załóż pokrywkę. Bakterie oznaczone fluorescencją są gotowe do wizualizacji.

Zaczynając od zapasu fluorescencyjnych biomolekuł przygotowanych w buforze o niskiej wytrzymałości jonowej, przenieś do pięciu