Precyzyjna i wysokoprzepustowa analiza wzrostu bakterii z użyciem czytnika mikropłyt

Zacznij od bakterii zachowanych w zapasie glicerolu, wcześniej hodowanych do wczesnej fazy wykładniczej, aby zapewnić jednolity stan fizjologiczny i powtarzalny wzrost.

Dodaj podłoże wzrostu i wir, aby równomiernie zawiesił bakterie.

Rozcieńczaj zawiesinę seryjnie za pomocą świeżego medium, aby uzyskać różne gęstości komórek początkowych.

Próbki załaduj do wewnętrznych dołków płyty wielodołowej, pozostawiając otwory na krawędzi wypełnione pustym medium, aby zminimalizować zmienność związaną z parowaniem.

Umieść płytkę w czytniku mikropłytek, ustawionym tak, aby utrzymać stałe potrząsanie i temperaturę optymalną dla wzrostu bakterii.

W miarę rozmnażania się bakterii wzrasta gęstość optyczna lub OD hodowli.

Mierz przedawkowanie w określonych odstępach.

Odejmij początkowe wartości OD uzyskane z pustych otworów, aby skorygować absorpcję tła.

Następnie oblicza tempo wzrostu na podstawie kolejnych wartości przedawkowania mierzonych w określonych odstępach czasowych, co umożliwia wysoką przepustowość i precyzyjne określenie dynamiki wzrostu bakterii.

Aby w czasie rzeczywistym rejestrować wzrost, należy dodać około 25 mililitrów M63 do zbiornika sterylnego odczynnika. Następnie do mikrorurek należy dodać 900 mikrolitrów M63 w przygotowaniu do rozcieńczania seryjnego. Następnie dodaj 900 mikrolitrów M63 do rozmrożonego bulionu glicerolowego i wiru.

Przenieś 100 mikrolitrów 10-krotnego rozcieńczenia do innej mikrorurki zawierającej 900 mikrolitrów M63 i wiru. Powtarzaj ten krok, aż osiągniesz pożądaną liczbę rozcieńczeń. Teraz napełnij dołki na krawędzi sterylnej mikropłytki o płaskim dnie o pojemności 96 wejść 200 mikrolitrów M63, używając pipety ośmiokanałowej.

Załaduj 200 mikrolitrów każdej rozcieńczonej próbki do dołków mikropłyt zgodnie z tabelą referencyjną. Aby uniknąć warstw alokacyjnych ze względu na ogrzewanie i efektywność siewu, nigdy nie używaj dołków na krawędzi mikropłytki do próbek i ładuj tę samą próbkę do wielu dołków w różnych miejscach na mikropłycie. Umieść mikropłytkę 96 dołków na czytniku płyt.

Otwórz Read Now w Menedżerze zadań i wybierz program. Kliknij OK, aby zacząć mierzyć. Na koniec zapisz nagranie jako nowy plik eksperymentalny do analizy danych.