Precyzyjna i wysokoprzepustowa analiza wzrostu bakterii z użyciem czytnika mikropłyt

Zacznij od bakterii zachowanych w zapasie glicerolu, wcześniej hodowanych do wczesnej fazy wykładniczej, aby zapewnić jednolity stan fizjologiczny i powtarzalny wzrost.

Dodaj podłoże wzrostu i wir, aby równomiernie zawiesił bakterie.

Rozcieńczaj zawiesinę seryjnie za pomocą świeżego medium, aby uzyskać różne gęstości komórek początkowych.

Próbki załaduj do wewnętrznych dołków płyty wielodołowej, pozostawiając otwory na krawędzi wypełnione pustym medium, aby zminimalizować zmienność związaną z parowaniem.

Umieść płytkę w czytniku mikropłytek, ustawionym tak, aby utrzymać stałe potrząsanie i temperaturę optymalną dla wzrostu bakterii.

W miarę rozmnażania się bakterii wzrasta gęstość optyczna lub OD hodowli.

Mierz przedawkowanie w określonych odstępach.

Odejmij początkowe wartości OD uzyskane z pustych otworów, aby skorygować absorpcję tła.

Następnie oblicza tempo wzrostu na podstawie kolejnych wartości przedawkowania mierzonych w określonych odstępach czasowych, co umożliwia wysoką przepustowość i precyzyjne określenie dynamiki wzrostu bakterii.

Aby w czasie rzeczywistym rejestrować wzrost, należy dodać około 25 mililitrów M63 do zbiornika sterylnego odczynnika. Następnie do mikrorurek należy