Ocena ochrony roli chaperonu aktywowanego kwasem w E. coli pod wpływem stresu kwasowego

Weź rekombinowane hodowle E. coli wrażliwe na stres środowiskowy.

Hodowla testowa zawiera plazmid kodujący kwasem aktywowany chaperon, natomiast hodowla kontrolna zawiera jedynie szkielet plazmidów.

Zaszczepić pojedyncze kolonie w podłożu uzupełnionym antybiotykiem, aby zapewnić zatrzymanie plazmidów, oraz inkubować, aby wspierać wzrost bakterii.

Rozcieńcz posiewy w świeżym podłożu zawierającym antybiotyk i induktor, aby aktywować ekspresję chaperona.

Hodować kultury do fazy średniej logariatu, a następnie rozcieńczać, aby uzyskać określoną gęstość optyczną.

Dodaj kwas obniżając pH, wywołując stres kwasowy.

W hodowli testowej warunki kwaśne aktywują chaperon, który stabilizuje białka komórkowe i zapobiega ich agregacji. W hodowli kontrolnej brak chaperonu powoduje denaturację i agregację białek komórkowych.

Dodaj zasadę, aby zneutralizować pH i zatrzymać stres kwasowy.

Monitoruj wzrost bakterii, mierząc gęstość optyczną w czasie.

Zwiększony wzrost w hodowli testowej wskazuje na ochronną rolę opiekuna podczas stresu kwasowego.

Przygotuj nocną hodowlę w 50 mililitrach LB z ampicyliną i hoduj komórki w temperaturze 200 obr./min i 30 stopni Celsjusza. Rozcieńcz hodowle nocne 40-krotnie do 25 mil