Wystawienie syntetycznej społeczności bakteryjnej jamy ustnej na symulowane fazy trawienia

Zacznij od rurki zawierającej syntetyczną społeczność bakteryjną, powszechnie występującą w jamie ustnej.

Dodaj symulowany płyn ślinowy zawierający mucinę, glikoproteinę oraz enzym α-amylazę, aby naśladować środowisko jamy ustnej, a następnie inkubuj z potrząsaniem.

Bakterie oddziałują z muciną, co sprzyja agregacji, podczas gdy α-amylaza odtwarza enzymatyczne warunki śliny.

Pobierz próbkę.

Następnie wprowadź symulowany płyn żołądkowy z muzyną o kwaśnym pH, aby naśladować środowisko żołądka, i inkubuj z potrząsaniem.

Warunki kwaśne zabijają gatunki bakterii wrażliwych na kwasy, ale przetrwają gatunki bakterii tolerujące kwasy i pokryte mucyną, lekko odporne na kwas.

Zbierz kolejną próbkę.

Na koniec dodaj symulowany płyn jelitowy zawierający wodorowęglany i sole fizjologiczne. Inkubuj z drżeniem.

Środowisko bogate w sól wywołuje stres jonowy, który zakłóca błonę bakteryjną i zmniejsza żywotność.

Pobierz ostateczną próbkę.

Wszystkie trzy próbki po symulacji są już gotowe do oceny żywotności bakterii.

Aby zasymulować trawienie jamy ustnej, przelej 3 mililitry społeczności bakteryjnej do 50-mililitrowej sterylnej probówki i wymieszaj z 3 mililitrami symulowanego płynu ślinowego (SSF).

Dodaj 75 jednostek alfa-amylazy na mililitr z ludzkiej śliny typu 9A oraz dwa gramy na litr śluzu z typu 2 żołądka wieprzowego. Inkubuj mieszankę w temperaturze 37 stopni Celsjusza i 100 obr./min przez dwie minuty. Pobierz próbkę o wielkości 2 mililitrów do ekstrakcji DNA i ilościowej identyfikacji cytometrii przepływowej.

Aby zasymulować trawienie żołądka, należy dodać 4 mililitry symulowanego płynu żołądkowego (SGF) do 3 mililitrów bakterii. Użyj jednego trzonowego HCl, aby w razie potrzeby ustawić pH do 3. Inkubuj próbkę w temperaturze 37 stopni Celsjusza i 100 obr./min przez dwie minuty.

Następnie pobierz próbkę 2 mililitrów. Do trawienia jelita cienkiego dodaj 4 mililitry symulowanego płynu jelitowego (SIF) do bakterii. Użyj wodorotlenku sodu, aby w razie potrzeby dostosować pH.

Następnie inkubuj próbkę w temperaturze 37 stopni Celsjusza i 100 obr./min przez dwie minuty, a następnie pobieraj próbkę o pojemności 2 mililitrów.