Izolacja bakterii adaptowanych do stresu poprzez selekcję pojedynczej kolonii

Weź posiew bakteryjny, który był hodowany w warunkach stresu przez dłuższy czas.

Długotrwały stres prowadzi do spontanicznych mutacji, doboru naturalnego oraz rozprzestrzeniania się bakterii adaptowanych na stres.

Aby wyizolować te bakterie, należy nałożyć niewielką objętość hodowli na płytkę agarową zawierającą ten sam stresor i inkubować.

Stresor zapewnia wzrost wyłącznie kolonii bakteryjnych dostosowanych do stresu.

Wybierz jedną kolonię, aby zachować czystość genetyczną i zaszczep płynne podłoże stresorem.

Inkubuj przy wstrząsaniu, aby ułatwić wzrost bakterii przystosowanych do stresu.

Użyj niewielkiej ilości hodowli do zaszczepienia świeżego podłoża stresorem.

Jednocześnie zaszczep inne medium zawierające stresor bakteriami typu dzikiego lub nieprzystosowanym do stresu.

Mierz chłonność w regularnych odstępach czasu jako wskaźnik wzrostu bakterii.

Porównaj profil wzrostu, aby zapewnić skuteczną izolację bakterii adaptowanych na stres.

Przygotuj medium z płytek agarowych o wartości 1,6% zawierające ten sam stresor w tym samym stężeniu co w podłożu. Na talerz należy nałożyć 0,1 mililitra hodowli wylotowej z chemostatu i inkubować w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 16 godzin. Po inkubacji pobieraj pojedyncze kolonie z płytki za pomocą sterylnej wykałaczki i inokuluj je w probówkach o pojemności 15 mililitrów zawierających ten sam stresor i w tym samym stężeniu co w chemiocie.

Inkubuj przez sześć godzin. Przelej jeden mililitr bulionu hodowlanego do kolby Erlenmeyera o pojemności 250 mililitrów i 50 mililitrów podłoża. Zbieraj 0,5 mililitra bulionu kulturowego co godzinę i mierz gęstość optyczną na 600 nanometrów.

Porównaj tempo wzrostu szczepu adaptowanego z tempem wzrostu szczepu typu dzikiego, biorąc pod uwagę czynnik stresoru