JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:07 min. • November 28th, 2025
Zacznij od próbki wody morskiej zawierającej różnorodne społeczności mikroorganizmów, w tym bakterie zdolne do rozkładu węglowodorów.
Wykonaj seryjne rozcieńczenia próbki w soli fizjologicznej, aby zmniejszyć gęstość mikroorganizmów.
Dodaj ropę naftową do sterylnej wody destylowanej i mieszaj mieszaninę, aby częściowo rozpuścić węglowodory w tej wodzie.
Pozwól mieszance się oschnąć, rozdzielając ją na frakcje oleju rozpuszczalne w wodzie i nierozpuszczalne w wodzie.
Przygotuj selektywne płytki agarowe, wykorzystując każdą frakcję oleju jako jedyne źródło węgla do wzbogacenia dla bakterii rozkładających lub hydrofobowych węglowodorów.
Rozcieńczone próbki wody morskiej nakładać na podłoże selektywne i inkubować w temperaturze otoczenia.
Kolonie, które się wykluwają, opierają się na enzymach takich jak hydroksylazy i dioksydazy do metabolizowania węglowodorów.
Zbieraj morfologicznie odrębne kolonie i przebieraj je na świeże podłoże zawierające tę samą frakcję oleju, aby uzyskać czyste kultury bakterii degradujących węglowodory.
Metoda ta umożliwia selektywną izolację bakterii morskich degradujących ropę.
Aby przygotować minimalne medium zawierające frakcję rozpuszczalną w oleju w wodzie oraz frakcję nierozpuszczalną w oleju w wodzie jako jedyne źródło węgla, dodaj 1-2% ropy surowej do 500 mililitrów sterylnej wody destylowanej w kolbie filtracyjnej z zaworem na dnie. Utrzymuj kolbę w stałym mieszaniu w temperaturze 24 do 28 stopni Celsjusza przy 150-krotności g przez 48 godzin. Następnie umieść kolbę na stabilnej powierzchni i odczekaj od 10 do 20 minut, aby frakcja rozpuszczalna i nierozpuszczalna się rozdzieliła.
Następnie otwórz dolną kolbę filtracyjną, aby przenieść rozpuszczalną frakcję w oleju w wodzie do nowej sterylnej kolby, oszczędzając frakcję nierozpuszczalną w oleju i wodzie. Następnie przygotuj dwie butelki agaru Bushnell Haas minimalnie średniego. Autoklawuj go.
Połącz z frakcją rozpuszczalną w oleju i wodzie jako jedynym źródłem węgla, aby uzyskać 500 mililitrów medium agarowego. Zrób to samo z nierozpuszczalną frakcją olejowo-wodną i przelej około 25 mililitrów każdego medium na poszczególne szalki Petriego. Aby wyizolować bakterie rozkładające olej, ponownie użyj wcześniej rozcieńczonych próbek i pipetuj 100 mikrolitrów każdego rozcieńczenia na szalki Petriego zawierające medium agarowe i nałóż je na płyty.
Pamiętaj, aby zachować negatywne kontrole dla swoich tablic. Inkubuj naczynia przez jeden do trzech dni w docelowej temperaturze i powtarzaj procedury izolacji jak wcześniej.