Transfekcja indukowalnego systemu ekspresji genów do komórek ekspresujących bakteryjne białko efektorowe

0 views • 2:43 min • November 28th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sprawdź ludzkie komórki ekspresyjne CaeB, antyapoptotyczne białko bakteryjne.

Użyj komórek bez CaeB jako kontroli.

Wprowadź odczynnik transfekcyjny złożony z systemem ekspresji genów indukowanym tetracykliną, zawierającym zarówno plazmidy regulatorowe, jak i odpowiedziowe.

Plazmid regulatorowy koduje aktywator transkrypcji i tłumik, natomiast plazmid odpowiedzi koduje białko pro-apoptotyczne kontrolowane przez TRE.

Inkubuj komórki, aby ułatwić pobieranie plazmidów i ekspresję białek regulacyjnych.

Bez tetracykliny aktywator pozostaje nieaktywny, a tłumik tłumi transkrypcję sterowaną TRE.

Dodaj analog tetracykliny i inkubuj.

Analog umożliwia wiązanie aktywator–TRE, inicjując ekspresję białek pro-apoptotycznej.

W komórkach kontrolnych wywołuje to sygnalizację apoptotyczną, aktywując marker apoptotyczny.

W komórkach ekspresujących CaeB CaeB hamuje sygnalizację apoptotyczną, zmniejszając aktywację markerów.

Zmniejszona aktywacja markerów w komórkach ekspresujących CaeB sugeruje, że CaeB hamuje apoptozę.

Rozpocznij ten zabieg od zasiewania komórek HEK293 stabilnie wyrażających GFP lub GFP-CaeB w płytkach z 12 dołkami o gęstości 100 000 komórek na dołek.

Następnie przygotuj oddzielnie odczynnik transfekcyjny DNA i polietyliminy w 75 mikrolitrach medium Opti-MEM i inkubuj przez pięć minut w temperaturze pokojowej. Do tworzenia złożonych mieszanin inkubuj obie mieszaniny razem przez 15 minut w temperaturze pokojowej. Następnie dodaj roztwór DNA polietyiminy kropelo do komórek i inkubuj w temperaturze 37 stopni Celsjusza w stężeniu 5% dwutlenku węgla.

Pięć godzin po transfekcji indukuj ekspresję białek proapoptotycznych, dodając do pożywki jeden mikrogram na mililitr doksycykliny. Następnie inkubuj komórki przez 18 godzin w temperaturze 37 stopni Celsjusza w stężeniu 5% dwutlenku węgla.

10:29

Zastosowanie transferu energii rezonansu fluorescencyjnego (FRET) do zbadania wydajności translokacji efektorowej przez Coxiella burnetii podczas wyciszania siRNA

Related Videos

0 Views

11:19

Indukowanie specyficznej dla miejsca blokady replikacji u E. coli przy użyciu systemu operatora represora fluorescencyjnego

Related Videos

0 Views

07:10

Oparta na fluorescencji metoda badania regulacji genów bakteryjnych w zakażonych tkankach

Related Videos

0 Views

02:57

Indukowalna ekspresja łańcucha toksyny rycynowej A oznaczonej hastydyną w E. coli

Related Videos

0 Views

06:19

Indukowalny system regulowany Tet-Off: metoda in vitro do modulacji ekspresji genów w hodowanych komórkach przy użyciu systemu Tetracyklina-Off

Related Videos

0 Views

04:41

Wprowadzenie bakteryjnych białek efektorowych do komórek ssaków za pomocą elektroporacji

Related Videos

0 Views

08:39

Elektroporacja funkcjonalnych efektorów bakteryjnych w komórkach ssaków

Related Videos

0 Views

08:51

Zastosowanie indukowalnego systemu ekspresji do badania interferencji bakteryjnych czynników wirulencji z sygnalizacją wewnątrzkomórkową

Related Videos

0 Views

10:00

Kontrolowana ekspresja kanału jonowego poprzez indukowalną transfekcję przejściową

Related Videos

0 Views

12:09

Przejściowa ekspresja i lokalizacja komórkowa rekombinowanych białek w hodowanych komórkach owadów

Related Videos

0 Views

Last updated: 11 July 2026