Ciągłe monitorowanie szumu biologicznego u bakterii za pomocą mikroskopii poklatkowej

Rozpocznij od płytki hodowlającej zawierającą bakterie osadzone pod żelową podkładką agarozową, aby unieruchomić bakterie i wspierać wzrost monowarstw.

Bakterie konstytutywalnie wyrażają zielone fluorescencyjne białko, umożliwiając monitorowanie ekspresji genów w czasie rzeczywistym.

Dodatkowy żel agarozowy wokół podkładki przelej próbkę, aby zamknąć próbkę i pozwól jej zastygnąć w temperaturze pokojowej.

Uszczelnij płytę taśmą, przebij ją, aby umożliwić wymianę gazów, i odwróć ją, aby zapobiec kondensacji.

Inkubuj płytkę w niskiej temperaturze, aby ustabilizować żel i zapobiec podziałowi bakterii.

Następnie nałóż olej immersyjny na obiektyw i umieść płytkę na stole mikroskopu konfokalnego.

Rozpocznij obrazowanie poklatkowe.

W miarę stopniowego dojrzewania GFP zaczyna fluorescencje. Podczas podziału komórek te fluorescencyjne białka są rozprowadzane pomiędzy komórkami potomnymi, powodując spadek intensywności fluorescencji.

Tworzy to ząbkowaty wzór fluorescencji, a różnice w tym wzorze między genetycznie identycznymi komórkami w tym samym środowisku wykazują biologiczny szum w ekspresji genów.

Aby zobrazować próbki, wyjmij kolbę z wody i pozwól roztworowi żelowi ostygnąć do temperatury ciał