JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:12 min • November 28th, 2025
Zacznij od rurki umieszczonej w komorze beztlenowej, która zawiera bogate w składniki odżywcze podłoże oraz wstępnie nawodniony fermentowalny błonnik.
Warunki niedotleniające wewnątrz rurki naśladują beztlenowe środowisko ludzkiego jelita grubego.
Następnie dodaj do probówki rozcieńczoną, ujednoliconą próbkę kału zawierającą drobnoustroje jelitowe i inkubuj ją.
Regularnie odwracaj rurkę, aby wymieszać mikroby z włóknem.
Podczas inkubacji mikroorganizmy beztlenowo metabolizują i fermentują błonnik, produkując krótkołańcuchowe kwasy tłuszczowe i inne metabolity, obniżając pH podłoża.
Zbieraj aliquoty z fermentującej mieszaniny w regularnych odstępach czasu, aby monitorować produkcję metabolitów i sprawdzać ich pH.
Wiruj aliquoty w niskich temperaturach, aby oddzielić biomasę mikroorganizmów w granulat.
Przenieś supernatant zawierający metabolity i krótkołańcuchowe kwasy tłuszczowe do świeżej rurki.
Zamroz zarówno biomasę mikroorganizmów, jak i supernatant w ciekłym azocie.
Na koniec przechowuj próbki w niskiej temperaturze do dalszej analizy.
Utrzymuj zaszczepione rurki w temperaturze 37 stopni Celsjusza wewnątrz komory beztlenowej i delikatnie odwracaj co godzinę, aby ponownie zawiesować włókna i inokulum. Po 3, 6, 9 lub 24 godzinach wyjmij odpowiednią ilość fermentowanego medium i wiruj próbki w 14 000 g przez 10 minut w temperaturze czterech stopni Celsjusza.
Natychmiast zamroz supernatant i pellet w ciekłym azocie, a po zamrożeniu przechowuj supernatant do analizy krótkołańcuchowych kwasów tłuszczowych oraz pellet do analizy mikrobiomu w temperaturze minus 80 stopni Celsjusza.