Podejście oparte na chromatografii cieczowej – spektrometrii mas do analizy metabolitów S. aureus

Zacznij od Staphylococcus aureus zawieszonego w roztworze hartującym zawierającym kulki krzemionki, przechowywane w niskiej temperaturze, aby zachować stan metaboliczny.

Homogenizacja bakterii w warunkach zimnych, aby uwolnić zawartość wewnątrzkomórkową, minimalizując enzymatyczną degradację metabolitów.

Wiruj lizat i pobieraj supernatant bogaty w metabolity.

Do ekstraktu dodaj rozpuszczalnik organiczny oraz wir, aby wytrącić makrocząsteczki z rozpuszczalnych metabolitów.

Wiruj w wirówce, aby wypuścić osad i przenieść supernatant do fiolek.

Załaduj fiolki do systemu chromatografii ciekłej i spektrometrii mas.

Wewnątrz kolumny chromatografii metabolity oddziałują z stałą fazą stacjonarną na podstawie swoich właściwości chemicznych.

Dodaj bufor, aby wylučować metabolity. Następnie skieruj metabolity do źródła jonizacji elektrosprayowej spektrometru masowego, aby je zjonizować.

Jony są następnie rozdzielane na podstawie stosunku masy do ładunku.

Uzyskane dane są porównywane z bazą referencyjną w celu identyfikacji metabolitów.

Aby rozpocząć ekstrakcję metabolitów, najpierw rozmroz próbki na mokrym lodzie. Następnie rozbij ogniwa w homogenizatorze czterema 30-sekundowymi wybuchami z prędkością 6