JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:35 min • November 28th, 2025
Zacznij od zaszczepienia pętli szczepu cyjanobakterii na podłoże wzrostowe. Inkubuj, aby komórki mogły rosnąć do pożądanej gęstości.
Płucz komórki przez wirówkę i wyrzucaj supernatant zawierający pozostałości metabolitów i zanieczyszczenia.
Ponownie zawiesić pellet w niewielkiej objętości podłoża wzrostowego, aby uzyskać skoncentrowaną zawiesinę.
Wymieszaj aliquot tej zawiesiny z glicerolem, krioprotektantem stabilizującym błonę i zapobiegającym powstawaniu kryształków lodu podczas zamarzania.
Do innej aliquoty dodaj dimetylosulfoksyd, krioprotektant, który przenika przez komórki i hamuje jądrowanie lodu.
Przechowuj próbki w niskich temperaturach, gdzie aktywność metaboliczna zatrzymuje się, a komórki pozostają żywotne przez dłuższy czas.
Aby ożywić, zeskrobaj niewielką ilość zamrożonej biomasy na płytkę agarową bez antybiotyków i smuży, aby zmniejszyć stres i wspierać stopniową regenerację.
Metoda ta umożliwia długoterminową krioprezerwację i ożywienie szczepów cyjanobakterii do przyszłych badań.
Aby przechowywać szczepy na dłuższą metę, przygotuj świeżą hodowlę szczepu, zaszczepiając pętlę pełną komórek w 30 do 50 mililitrów podłoża BG11. Uprawiaj hodowlę przez trzy do czterech dni do przedawkowania750 , równego 0,4 do 0,7.
Po użyciu BG11 do ponownego przemycia komórek, ponownie zawiesij pellet w około dwóch mililitrach BG11. Dodaj 0,8 mililitra skoncentrowanych komórek do jednej probówki. Następnie dodaj 0,2 mililitra sterylizowanego glicerol filtrowanego przez filtr 80%.
Do innej probówki dodaj 0,93 mililitra skoncentrowanych ogniw i 0,07 mililitra DMSO. Przechowuj obie rurki w temperaturze -80 stopni Celsjusza. Aby ożywić szczepy, usuń rurkę i użyj końca, aby zeskrobać niektóre komórki na płytkę agarową bez antybiotyków. Następnie użyj sterylnej pętli, żeby wyciągnąć pasy jak zwykle.