JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:22 min. • January 30th, 2026
Weź czerwone krwinki (SRBC) z IgM-opsonizowanymi owcami z przeciwciałami IgM związanymi z antygenami powierzchniowymi komórek.
Dodaj surowicę zawierającą białka uzupełniające z wyjątkiem C5.
Kompleks C1 wiąże się z przeciwciałami i staje się aktywny.
Aktywowany C1 rozszczepia C4 i C2, tworząc konwertazę C3, która następnie rozszczepia C3 i odkłada C3b na SRBC.
Bez C5 C3b degraduje się do C3bi.
Dodaj SRBC do hodowli makrofagów.
C3bi wiąże się z receptorem makrofagowym, wywołując fagocytozę SRBC.
Dodaj roztwór hipotoniczny do lizy i usuń nieinternalizowane SRBC.
Dodaj bufor lizowy, aby rozłożyć komórki i uwolnić hemoglobinę SRBC.
Wprowadź odczynnik wykrywający.
W obecności mocznika hemoglobina katalizuje utlenianie diaminofluorenu przez nadtlenek wodoru, tworząc produkt kolorowy.
Zmierz absorpcję produktu kolorowego, która jest proporcjonalna do fagocytozy SRBC.
Ten test modeluje fagocytozę bakterii oznaczonych przeciwciałami, wykorzystując opsonizowane SRBC do naśladowania celów bakteryjnych.
W badaniu opsonizacyjnym inkubuj 2 razy 10 do ósmej owcy, czyli czerwonych krwinek (SRBC), z 50 mikrolitrami króliczej immunoglobuliny anty-SRBC M lub IgM przez 30 minut w temperaturze pokojowej.
Następnie i
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych