JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:42 min. • January 30th, 2026
Rozpocznij od dodania roztworu zawierającego bakteryjne sondy fluorescencji in situ in situ (FISH) specyficzne dla bakteryjnego 16S rRNA do preparatu zawierającego fragmenty jelita myszy skolonizowane przez bakterie.
Umieść pokrywkę, aby rozprowadzić sondy zawierające ciecz i zapobiec parowaniu.
Inkubuj szkiełko w nawilżonej komorze w podwyższonej temperaturze.
To rozwija strukturę wtórną RNA, ułatwiając hybrydyzację sondy z komplementarnymi sekwencjami w bakteryjnym rRNA 16S.
Usuń slip i inkubuj szkiełko w podgrzanym buforze do prania, aby usunąć niezwiązane sondy.
Płukaj fosforanem buforem, aby utrzymać pH fizjologiczne.
Nałóż barwnik przeciwbarwny zawierający barwnik specyficzny dla śluzu oraz barwnik jądrowy i inkubuj.
Te barwniki selektywnie wiążą się ze śluzem jelitowym oraz z DNA komórek bakteryjnych i gospodarzy. Opłucz zamek buforem i zamontuj pokrywy na zamku za pomocą nośników montażowych.
Pod mikroskopem konfokalnym obserwuj różne bakterie oznaczone przez FISH, komórki jelit oraz warstwę śluzu w przekrojach.
Tworz bardzo ciasne okręgi wokół każdego fragmentu tkanki, używając blokera płynnego lub długopisu PAP, aby ograniczyć obszar rozszerzania potrzebny do pokrycia roztworem hy
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych