JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:04 min. • January 30th, 2026
Rozpocznij od hodowli Legionella pneumophila, patogennej bakterii Gram-ujemnej uwalniającej pęcherzyki błony zewnętrznej.
Te OMV zawierają lipopolisacharydy i białka błonowe, które przyczyniają się do zjadliwości bakterii.
Wiruj hodowlę, aby wypuścić nienaruszone bakterie.
Zbierz supernatant zawierający OMV i ponownie wiruj do granulacji bakterii pozostałych.
Przefiltruj supernatant przez membranę, aby usunąć pozostałe bakterie, zachowując jednocześnie OMV.
Wykonaj drugą filtrację za pomocą świeżej membrany, aby usunąć zanieczyszczenia bakteryjne.
Zbierz filtrat wolny od bakterii i poddaj go ultrawirówce, aby rozpylić OMV.
Usuń supernatant, ponownie zawiesij pellet w buforze i ponownie zawiruj w ultrawirówce, aby usunąć luźno powiązane białka i lipopolisacharydy.
Usuń supernatant i ponownie zawiesij oczyszczone OMV w buforze.
Nanieś aliquot OMV na agar krwi i płyty agaru BCYE i inkubować.
Brak formowania się kolonii potwierdza brak skażenia bakteryjnego.
Przechowuj OMV w niskiej temperaturze do badań interakcji gospodarz z patogenem.
Resztę płynnej kultury dodaj do 90 mililitrów świeżego medium YEB i inkubuj ją na obrotowym shakerze, aż osiągnie OD600 wynoszący 3,0 do 3,5. Wiruj hodowlę cieczy
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych