Izolacja komórek nabłonkowych pęcherza myszy zawierających wewnątrzkomórkowe społeczności bakteryjne

Zacznij od komórek nabłonka pęcherza pobranych z mysiego pęcherza zakażonego fluorescencyjnie oznakowanym uropatogennym E. coli.

Podczas infekcji bakterie te atakują komórki nabłonkowe i tworzą wewnątrzkomórkowe społeczności bakteryjne, czyli IBC — struktury przypominające biofilm, które chronią je przed odpornością gospodarza.

Pod mikroskopem rozcinającym rozpoznaj IBC jako duże agregaty fluorescencyjne zamknięte w poszczególnych komórkach nabłonkowych.

Złóż zestaw do mikropipetowania ustnego, używając kapilary z wyciąganego szkła połączonego z pipetą aspirującą, aby izolować pojedyncze komórki nabłonkowe zawierające IBC.

Krótko zanurz końcówkę kapilary w PBS, aby zmniejszyć pobieranie płynu napędzanego przez kapilary.

Umieść kapilarę blisko wybranej komórki nabłonka fluorescencyjnego i delikatnie zasysaj, aby wciągnąć pojedynczą komórkę zawierającą IBC, unikając niezakażonych komórek i bakterii zewnątrzkomórkowych.

Wydalić komórkę do sterylnej rurki mikrowirówki przy użyciu lekkiego dodatniego ciśnienia, zachowując żywotność bakterii.

Metoda ta umożliwia izolację komórek nabłonkowych zawierających IBC do analizy pojedynczych komórek.

Gdy wszystkie komórki zostaną zeskrobane, włóż niewyci