JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:56 min. • February 2nd, 2026
Zacznij od komórek nabłonka pęcherza pobranych z mysiego pęcherza zakażonego fluorescencyjnie oznakowanym uropatogennym E. coli.
Podczas infekcji bakterie te atakują komórki nabłonkowe i tworzą wewnątrzkomórkowe społeczności bakteryjne, czyli IBC — struktury przypominające biofilm, które chronią je przed odpornością gospodarza.
Pod mikroskopem rozcinającym rozpoznaj IBC jako duże agregaty fluorescencyjne zamknięte w poszczególnych komórkach nabłonkowych.
Złóż zestaw do mikropipetowania ustnego, używając kapilary z wyciąganego szkła połączonego z pipetą aspirującą, aby izolować pojedyncze komórki nabłonkowe zawierające IBC.
Krótko zanurz końcówkę kapilary w PBS, aby zmniejszyć pobieranie płynu napędzanego przez kapilary.
Umieść kapilarę blisko wybranej komórki nabłonka fluorescencyjnego i delikatnie zasysaj, aby wciągnąć pojedynczą komórkę zawierającą IBC, unikając niezakażonych komórek i bakterii zewnątrzkomórkowych.
Wydalić komórkę do sterylnej rurki mikrowirówki przy użyciu lekkiego dodatniego ciśnienia, zachowując żywotność bakterii.
Metoda ta umożliwia izolację komórek nabłonkowych zawierających IBC do analizy pojedynczych komórek.
Gdy wszystkie komórki zostaną zeskrobane, włóż niewyciągnięty koniec wyciągniętej szklanej kapilary do gumowego korka rurki aspiratora i mocno dopasuj wąski koniec pipety o średnicy 1 mililitra do drugiego otwartego końca rurki.
Szczelnie włóż wąski koniec 2-mililitrowej pipety aspirującej do otwartego, szerszego końca końcówki pipety 1-mililitrowej i umieść zeskrobany zawiesin komórkowy pod mikroskopem rozcinającym. Za pomocą powiększenia 20 do 40 razy zidentyfikowaj IBC jako duże agregaty fluorescencyjne i zanurz cienki koniec szklanej kapilary w świeżej rurce PBS na 1 sekundę, aby zmniejszyć absorpcję niepożądanej objętości przez działanie kapilarne.
Gdy zlokalizowany jest interesujący się IBC, powoli zbliż otwarty koniec rurki kapilarnej w stronę IBC i wywieraj bardzo niewielką siłę ssącą na pipetę aspirującą, aby skierować IBC do szklanej kapilary. Następnie przenieś kapilarę do pustej rurki wirówki o pojemności 1,5 mililitra i przyłożyć lekkie dodatnie ciśnienie, aby wypchnąć kroplę i IBC do rurki.