JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 4:02 min. • February 2nd, 2026
Weźmy całkowite RNA wyekstrahowane z mózgu myszy zakażonego bakteriami patogennymi. Ekstrakt zawiera transkrypcje genów reagujących na infekcje.
Dodaj enzym degradujący DNA i inkubuj, aby rozłożyć resztki genomowego DNA.
Dodaj mieszankę główną zawierającą enzym transkryptozy odwróconej (RT), nukleotydy i niespecyficzne startery.
Inkubować w celu syntezy DNA komplementarnego (cDNA).
Wprowadź wysoką temperaturę, aby dezaktywować enzym RT.
Weź mieszankę główną zawierającą polimerazę DNA, nukleotydy, dwuniciowy barwnik wiążący DNA oraz startery specyficzne dla docelowego genu.
Dodaj cDNA i zastosuj ciepło, aby zdenaturować DNA.
Primer wiąże się z docelowym cDNA, umożliwiając syntezę nowych nici DNA.
Cykl ten powtarza się, aby wzmocnić gen docelowy.
Barwnik wiąże się z amplifikowanym DNA i emituje fluorescencję, która jest rejestrowana na końcu każdego cyklu.
Wzrost fluorescencji potwierdza ekspresję genu reagującego na infekcje w zakażonym mózgu myszy.
Zainfekuj wszystkie myszy za pomocą komórek planktonowych lub komórek stanu biofilmowego i przeprowadz eutanazję zgodnie z protokołem tekstowym. Następnie należy wyodrębnić całkowite RNA z tkanki mózgowej za pomocą zestawu do ekstrakcji RNA.
Dla każ
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych