JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:25 min • February 2nd, 2026
Weź fiolkę z pokrywką na agar odżywczy, pokrytą papierem filtracyjnym.
Nałóż zawiesinę bakterii patogennych na papier filtracyjny.
Włóż do fiolki wygłodniałą muchę Drosophila melanogaster , a następnie załóż pokrywkę. Inkubuj, aby umożliwić karmienie i zapewnić połknięcie bakterii.
Spożyte bakterie dostają się do jelit i przenikają przez błonę ochronną wyłożoną światło.
Bakterie przylegają do nabłonka pod spodem, uwalniają toksyny sprzyjające uszkodzeniom nabłonka i jego inwazji, a także kolonizują tkanki wewnętrzne.
Zanurz muchę w alkoholu, aby usunąć bakterie z powierzchni, a następnie przepłucz alkohol.
Dodaj bufor i ujednolic muchę, aby uwolnić wewnętrzne bakteryjne składniki.
Wykonaj seriowe rozcieńczenia homogenatu na mikropłycie. Następnie rozcieńczenia nakładamy na agar odżywczy i inkubuj, aby umożliwić powstanie kolonii.
Policz kolonie, aby określić liczbę żywotnych komórek bakteryjnych powstałych w wyniku infekcji jamy ustnej u muchy.
Na dwie do czterech godzin przed infekcją jamy ustnej przenieś muchy do standardowych fiolek z agarem bez pożywienia. Tymczasem dla każdej muchy przygotuj fiolkę z infekcją.
Najpierw zapełnij pokrywkę probówki o pojemności 7 mililitrów 500 mikrolitrów standardowego agaru cukrowego i pozwól jej zastygnąć. Następnie włóż tarczę papieru filtrującego do agaru. Następnie pipetować 100 mikrolitrów hodowli bakterii bezpośrednio na tarczę filtrującą. Do kontroli używaj 5% wody sacharozowej.
Po okresie głodzenia przenieś pojedyncze muchy do przygotowanych rurek. Po wysiadaniu much przez 18 do 24 godzin, sterylizuj je powierzchniowo. Wkładaj osoby do probówki zawierającej 100 mikrolitrów etanolu 70%.
Po 20 do 30 sekundach usuń etanol i zastąp go 100 mikrolitrami potrójnie destylowanej wody. Po kolejnych 20 do 30 sekundach usuń wodę. Następnie dodaj 100 mikrolitrów PBS i ujednolic muchę.
Przenieś homogenat do górnego rzędu płyty z 96 dołkami i dodaj 90 mikrolitrów 1x PBS do każdego dołku poniżej. Następnie, używając alikwotów 10 mikrolitrów, rozcieńczaj ją szerejnie, aby rozróżnić zakres wartości CFU. Następnie nakładaj rozcieńczenia seryjne na płytkę LB z agarem odżywczym w kroplach 5 mikrolitrów.
Umieść krople tak, aby dyskretnie znajdowały się na płytce. Następnie inkubuj talerz przez noc. Następnego dnia oblicz liczbę CFU z rozcieńczenia, które daje od 10 do 60 wyraźnie widocznych kolonii.