JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:12 min. • January 30th, 2026
Weź mieszaninę zawierającą równe objętości dwóch zawiesin Agrobacterium tumefaciens , z których każda zawiera plazmid – jeden kodujący GFP, a drugi kodujący białko efektorowe.
Przebij dziurę i użyj bezigłowej strzykawki, aby wniknąć mieszankę do dolnej powierzchni zdrowych, w pełni rozciągniętych liści Nicotiana benthamiana 16c.
Nadmierną zawiesina przetłuć tkankami miękkimi, aby zapobiec przerostowi bakterii.
Oznacz miejsca infiltrowane i inkubuj rośliny w optymalnych warunkach wzrostu.
Agrobakteria przenosi DNA plazmidów do komórek roślinnych, gdzie geny GFP i efektorowe są transkrybowane do mRNA i tłumaczone na białka.
System obronny elektrowni wykorzystuje wyciszanie RNA, gdzie dupleksowe siRNA są ładowane do RISC. Nić pasażerska jest usuwana, a przewodnia przewodnia kieruje kompleksem degradację docelowego mRNA GFP.
Jednak białka efektorowe wiążą się z siRNA, zapobiegając ich powiązaniu z RISC i pozwalając na utrzymywanie się fluorescencji GFP.
Umożliwia to identyfikację efektorów patogenów tłumiących wyciszanie RNA roślin.
Wymieszaj równe objętości kultury Agrobacterium zawierającej 35S zielone białko fluorescencyjne z kulturą Agrobacterium zawierającą supresora wirusa mozaiki ogórka
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych