Izolacja bakterii z jelita śródżałowego komarów

Zacznij od preparatu zawierającego znieczulonego dorosłego komarca w kropli soli fizjologicznej z buforem fosforanowym lub PBS.

Pod mikroskopem rozcinającym usuń komarowi nogi, skrzydła i głowę.

Odetnij czubek brzucha, aby nie uszkodzić przewodu pokarmowego.

Zabezpiecz tułów i koniec jamy brzusznej, a następnie delikatnie wyciągnij przewód pokarmowy, aby ją wyjąć.

Usunięty przewód pokarmowy obejmuje jelita środkowe, odpowiedzialne za trawienie i przebywające w różnych bakteriach jelitowych wpływających na fizjologię komarów.

Przy większym powiększeniu ostrożnie usuń otaczające struktury, aby odizolować śródjelitowe odcięcie.

Przenieś izolowane jelito środkowe do świeżej rurki zawierającej PBS.

Homogenizuj jelito środkowe, aby uwolnić bakterie do PBS.

Rozproszy rozcieńczony homogenat na płytkę z agarem odżywczym.

Inkubuj płytkę, aby umożliwić wzrost kolonii bakteryjnych, reprezentujących florę mikrobiograficzną jelita śród-jelitowego komarów.

Rozciągnij komara osobno na sterylnym szkiełku z kroplą PBS. Ostrożnie usuń nogi, skrzydła i głowę komara za pomocą kleszczy.

Zaciskaj klatkę piersiową komara i ostatnią część jamy brzusznej kleszczami i rozdziel, aby odizolować przewód pokarmowy.

Użyj kleszczy, aby usunąć roślinę i rurkę Malpighiego z przewodu pokarmowego. Roślina znajduje się z przodu przedniej części jelita środkowego i wypukła po spożyciu wody z cukrem. Rurki Malpighiego to grupa smukłych rurek wydalniczych na styku jelita środkowego i tylnego.

Przeciętą część jelita środkowego umieść w probówce EP z 200-litrowym sterylnym buforem PBS i zmiel ją sterylnym tłuczkiem na super czystym stole. Rozcieńczaj go seryjnie do trzech 10-krotnych rozcieńczeń po 50 mikrolitrów każdego rozcieńczenia na płytkę agarową LB, a następnie rozprowadzaj płytę.

Inkubuj płytkę w temperaturze 37 stopni przez jeden do dwóch dni, aż pojawią się pojedyncze kolonie.