JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:29 min. • February 2nd, 2026
Zacznij od transgenicznych zarodków danio o ekspresji fluorescencyjnie oznakowanych makrofagów, zamontowanych w niskotopniącej agarozie w talerzu obrazującym.
Te zarodki są zakażone fluorescencyjnie oznakowanym Mycobacterium marinum poprzez mikroiniekcję domięśniową do śródmózgowia, co inicjuje lokalną odpowiedź immunologiczną.
Okryj stwardniałą agarozę podłożem zarodkowym zawierającym leki znieczulające do utrzymania znieczulenia oraz inhibitory chemiczne tłumiące pigmentację, zapewniając przejrzystość optyczną podczas obrazowania.
Umieść talerz w komorze środowiskowej mikroskopu konfokalnego o wysokiej rozdzielczości.
Za pomocą oświetlenia jasnego pola zlokalizuj zainfekowany obszar.
Aktywuj kanały laserowe fluorescencyjne, ustaw pozycję początkową i końcową stosu Z oraz rozpocznij obrazowanie poklatkowe.
Wyobraź sobie zakażony makrofag, wypełniony fluorescencyjnymi bakteriami, gdy staje się zaokrąglony i nieruchomy.
Wskazuje to na rozpad cytoszkieletu i początek śmierci komórek litycznych.
Z czasem makrofag puchnie i pęka, uwalniając zawartość cytoplazmatyczną i zinternalizowane bakterie do otaczających tkanek, co jest charakterystyczne dla zapalnej śmierci komórek litycznych.
Gdy agaroza całkowicie zastygnie, przykryj ją warstwą wody z jaj. Po przygotowaniu komory środowiskowej umieść 35-milimetrową miskę ze szklanym dnem razem z danio dano w komorze środowiskowej. Otwórz diodę 405, z argonem na mocy 20% i DPSS 561 nanometrów. Ustaw odpowiednią moc lasera w ustawieniach widma.
Wybierz tryb akwizycji "XYZ" "Sequential Scan" i ustaw format obrazów na "512 na 512 pikseli". Przełącz się na "Live Data Mode", celuj w pozycję pierwszego danio dano i zaznacz pozycje "Start" i "End" Z. Powtórz ten proces dla każdego z pozostałych zarodków. Dodaj "Pauzę" na końcu programu. Zdefiniuj pętlę i cykl programu oraz zapisz plik.