Obrazowanie na żywo śmierci komórek makrofagów podczas infekcji mykobakterią w zarodkach danio dano pręgowanego

Zacznij od transgenicznych zarodków danio o ekspresji fluorescencyjnie oznakowanych makrofagów, zamontowanych w niskotopniącej agarozie w talerzu obrazującym.

Te zarodki są zakażone fluorescencyjnie oznakowanym Mycobacterium marinum poprzez mikroiniekcję domięśniową do śródmózgowia, co inicjuje lokalną odpowiedź immunologiczną.

Okryj stwardniałą agarozę podłożem zarodkowym zawierającym leki znieczulające do utrzymania znieczulenia oraz inhibitory chemiczne tłumiące pigmentację, zapewniając przejrzystość optyczną podczas obrazowania.

Umieść talerz w komorze środowiskowej mikroskopu konfokalnego o wysokiej rozdzielczości.

Za pomocą oświetlenia jasnego pola zlokalizuj zainfekowany obszar.

Aktywuj kanały laserowe fluorescencyjne, ustaw pozycję początkową i końcową stosu Z oraz rozpocznij obrazowanie poklatkowe.

Wyobraź sobie zakażony makrofag, wypełniony fluorescencyjnymi bakteriami, gdy staje się zaokrąglony i nieruchomy.

Wskazuje to na rozpad cytoszkieletu i początek śmierci komórek litycznych.

Z czasem makrofag puchnie i pęka, uwalniając zawartość cytoplazmatyczną i zinternalizowane bakterie do otaczających tkanek, co jest charakterystyczne dla zapalnej śmierci komórek litycznych.

Gdy agaroz